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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 对PCR产物加A尾
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brightjoe

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 对PCR产物加A尾

我用的是高保真酶，PCR产物为平滑末端，如何用Taq酶对PCR产物加A尾？望说得详细一点。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:54 ]
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1楼2009-09-10 10:54:57
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merkel

铁虫 (初入文坛)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
看pGEM-T 载体的说明书，上面有，说明书网上有的下
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2楼2009-09-10 20:09:15
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zhaolixia0814

金虫 (小有名气)
★ ★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-23 18:02
用过天根的加A反应液，就是利用DNA聚合酶与dATP反应来加A，按说明书操作即可，效果还可以
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3楼2009-09-10 20:24:54
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dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-14 14:53
法一：所有循环结束后，暂停反应，在反应体系中加少量taq酶，72℃40min即可。
法二：pfu和taq混合跑pcr，即可加尾
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4楼2009-09-10 20:29:44
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yangxiaofei

★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
我是用TOYOBO KOD-plus扩，加尾很简单，反应结束后，50μ体系中加入1μTaq酶，72度保温10min即可，不需要格外加dATP，因为体系中的dATP是绝对足够的，特别是T载，很好连，也不需要所有的都加上尾巴，有一些就够了。
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5楼2009-09-10 22:37:55
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wrb456

铜虫 (初入文坛)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
你用高保真酶正常PCR结束之后，加入taq酶及其相应buffer，72℃半小时即可！
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6楼2009-09-10 23:45:35
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:28
无需加尾，直接连平端载体transgen的pEASY-blunt，双抗（amp+kan），topo克隆5min搞定
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7楼2009-09-11 00:24:39
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