应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 对PCR产物加A尾
71/1返回列表
查看: 1897  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

brightjoe

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 对PCR产物加A尾

我用的是高保真酶，PCR产物为平滑末端，如何用Taq酶对PCR产物加A尾？望说得详细一点。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:54 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-10 10:54:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merkel

铁虫 (初入文坛)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
看pGEM-T 载体的说明书，上面有，说明书网上有的下
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2009-09-10 20:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolixia0814

金虫 (小有名气)
★ ★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-23 18:02
用过天根的加A反应液，就是利用DNA聚合酶与dATP反应来加A，按说明书操作即可，效果还可以
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2009-09-10 20:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-14 14:53
法一：所有循环结束后，暂停反应，在反应体系中加少量taq酶，72℃40min即可。
法二：pfu和taq混合跑pcr，即可加尾
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2009-09-10 20:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangxiaofei

★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
我是用TOYOBO KOD-plus扩，加尾很简单，反应结束后，50μ体系中加入1μTaq酶，72度保温10min即可，不需要格外加dATP，因为体系中的dATP是绝对足够的，特别是T载，很好连，也不需要所有的都加上尾巴，有一些就够了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-10 22:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrb456

铜虫 (初入文坛)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
你用高保真酶正常PCR结束之后，加入taq酶及其相应buffer，72℃半小时即可！
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-09-10 23:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:28
无需加尾，直接连平端载体transgen的pEASY-blunt，双抗（amp+kan），topo克隆5min搞定
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-09-11 00:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 brightjoe 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +8 小聂爱学习 2026-04-16 10/500 2026-04-16 22:06 by 1shin_ichi
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +14 困困困困坤坤 2026-04-14 16/800 2026-04-16 22:02 by 猪会飞
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +3 小蜗牛* 2026-04-16 3/150 2026-04-16 21:23 by Art1977
[考研] 0831生医工第一轮调剂失败求助 +14 小熊睿睿_s 2026-04-11 18/900 2026-04-16 20:41 by lpl364211
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +7 zju2000 2026-04-14 18/900 2026-04-16 11:36 by 欢乐颂叶蓁
[考研] 085801电气专硕272求调剂 +19 电气李 2026-04-13 21/1050 2026-04-15 13:37 by 黑科技矿业
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 农学0904 312求调剂 +4 Say Never 2026-04-11 4/200 2026-04-14 09:10 by zs92450
[考研] 求调剂 +12 璃茉一定上岸 2026-04-10 13/650 2026-04-14 00:08 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 297工科，求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-10 16/800 2026-04-12 10:48 by zhouyuwinner
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +5 小麻子111 2026-04-10 5/250 2026-04-12 10:47 by zhouyuwinner
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 0858求调剂 5+5 Gky09300550， 2026-04-10 8/400 2026-04-10 19:13 by chemisry
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭