24小时热门版块排行榜    

查看: 1984  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

brightjoe

至尊木虫 (职业作家)

[交流] 对PCR产物加A尾

我用的是高保真酶,PCR产物为平滑末端,如何用Taq酶对PCR产物加A尾?望说得详细一点。谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 09:54 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dyyyyy

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-14 14:53
法一:所有循环结束后,暂停反应,在反应体系中加少量taq酶,72℃40min即可。
法二:pfu和taq混合跑pcr,即可加尾
4楼2009-09-10 20:29:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

merkel

铁虫 (初入文坛)


brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
看pGEM-T 载体的说明书,上面有,说明书网上有的下
2楼2009-09-10 20:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaolixia0814

金虫 (小有名气)

★ ★
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-11 12:27
brightjoe(金币+1,VIP+0): 9-23 18:02
用过天根的加A反应液,就是利用DNA聚合酶与dATP反应来加A,按说明书操作即可,效果还可以
3楼2009-09-10 20:24:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangxiaofei

★ ★
brightjoe(金币+2,VIP+0): 9-11 12:27
我是用TOYOBO KOD-plus扩,加尾很简单,反应结束后,50μ体系中加入1μTaq酶,72度保温10min即可,不需要格外加dATP,因为体系中的dATP是绝对足够的,特别是T载,很好连,也不需要所有的都加上尾巴,有一些就够了。
5楼2009-09-10 22:37:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-14 18:36 by 正能量1斤
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +10 Tide man 2026-08-10 11/550 2026-08-14 10:30 by 沁言学术
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见