24小时热门版块排行榜    

查看: 1560  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

树下的apple

新虫 (初入文坛)

[交流] 基因工程,构建表达质粒 已有3人参与

请问大佬们,构建表达质粒时,为验证目的片段与载体是否连接上,用NEB的T4连接酶连接后做了转化、菌液PCR可以扩出目的大小条带,提质粒后仍用NEB的酶做双酶切(50μl体系),质粒1μg定量,两种酶各用1μl, 37摄氏度切了7h也最终也没切开会是什么原因呢?用该质粒去扩目的片段也可以扩出来。酶加少了吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

画画的bb

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 树下的apple at 2022-05-29 22:48:22
谢谢您给出的建议。想问问您做酶切或连接用的哪家公司的酶呢?...

FUBIO
15371815028
5楼2022-05-30 10:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

隐约

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶失活了?有甲基化修饰?
2楼2022-05-25 10:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hoooobby

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做酶切酶连的时候,载体和片段酶切时间过长,会造成粘性末端破坏,连接上后,发现就切不开了
可以扩出来  大小也对    去测序  可能就会丢失几个剪辑
我遇到过
所以一般酶切不超过1h
一直科研狗快乐又自由!!!
3楼2022-05-26 15:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树下的apple

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by hoooobby at 2022-05-26 15:36:59
做酶切酶连的时候,载体和片段酶切时间过长,会造成粘性末端破坏,连接上后,发现就切不开了
可以扩出来  大小也对    去测序  可能就会丢失几个剪辑
我遇到过
所以一般酶切不超过1h

谢谢您给出的建议。想问问您做酶切或连接用的哪家公司的酶呢?
4楼2022-05-29 22:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +9 羊腰板 2026-08-21 9/450 2026-08-22 00:03 by anji999
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +15 archvillain 2026-08-15 27/1350 2026-08-21 11:32 by tim76
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见