应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 基因工程，构建表达质粒
51/1返回列表
查看: 1613  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

树下的apple

新虫 (初入文坛)

[交流] 基因工程，构建表达质粒 已有3人参与

请问大佬们，构建表达质粒时，为验证目的片段与载体是否连接上，用NEB的T4连接酶连接后做了转化、菌液PCR可以扩出目的大小条带，提质粒后仍用NEB的酶做双酶切（50μl体系），质粒1μg定量，两种酶各用1μl, 37摄氏度切了7h也最终也没切开会是什么原因呢？用该质粒去扩目的片段也可以扩出来。酶加少了吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-05-25 09:51:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

隐约

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶失活了？有甲基化修饰？
赞一下 回复此楼
2楼2022-05-25 10:00:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hoooobby

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做酶切酶连的时候，载体和片段酶切时间过长，会造成粘性末端破坏，连接上后，发现就切不开了
可以扩出来  大小也对    去测序  可能就会丢失几个剪辑
我遇到过
所以一般酶切不超过1h
赞一下 回复此楼
一直科研狗快乐又自由！！！
3楼2022-05-26 15:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

树下的apple

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hoooobby at 2022-05-26 15:36:59
做酶切酶连的时候，载体和片段酶切时间过长，会造成粘性末端破坏，连接上后，发现就切不开了
可以扩出来  大小也对    去测序  可能就会丢失几个剪辑
我遇到过
所以一般酶切不超过1h

谢谢您给出的建议。想问问您做酶切或连接用的哪家公司的酶呢？
赞一下 回复此楼
4楼2022-05-29 22:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

画画的bb

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 树下的apple at 2022-05-29 22:48:22
谢谢您给出的建议。想问问您做酶切或连接用的哪家公司的酶呢？...

FUBIO
回复此楼
15371815028
5楼2022-05-30 10:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 树下的apple 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:49 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:25 by Aj1rhIDL5ixY
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 16:25 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:00 by Aj1rhIDL5ixY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:57 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:45 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:13 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:01 by Aj1rhIDL5ixY
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:00 by Aj1rhIDL5ixY
[基金申请] 求教各位大神：2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀？ +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
[有机交流] 科研求助 10+4 我吃一只鱼 2026-09-07 4/200 2026-09-10 08:32 by 0940628
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭