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羧基聚苯乙烯微球表面抗体修饰 已有3人参与
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请问大家是怎么在微球表面进行抗体修饰的呀？我是在在MES缓冲液中加入100μl 羧基修饰的PS球，然后用EDC/NHS进行活化处理，洗球后在加入0.5mg/ml的单抗，4℃保存一夜。但是后面检测蛋白并没有信号感觉是抗体没有修饰上去，不知道有没有大佬做过类似的修饰，还请帮助 |
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楼主，我想请教一下，我用多抗化学偶联羧基胶乳微球，抗体等电点5～6，微球先在MES中用EDC、NHS活化，清洗后偶联抗体：第一种：在pH6.0的100mM MES中偶联，加入抗体后发现很快就出现絮状聚集，偶联3h后超声，前几次超开过，后来做了几次一直超不开；第二种：在pH7.4的100mM PBS中偶联，加入抗体后未发现聚集，但是偶联3h后离心，发现离心不下来（离心力和清洗裸微球时用的一样大，清洗时可以离心下来）。 请问在第一种方法中出现聚集的原因是什么呢，第二种方法中为什么偶联抗体后会离心不下来？ 十分困惑，非常期待您的解答！ 发自小木虫Android客户端 |
9楼2024-10-10 00:13:01
2楼2022-05-24 10:42:28
3楼2022-05-24 13:45:01
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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| 一般常规抗体偶联不需要4℃，除非你的微球供应商操作手册有明确要求；每步离心后需要充分再悬浮，保证微球的分散状态，普通振荡或涡旋达不到需求，量少水浴超声分散，量多要上超声设备了，所谓破坏抗体情况多在于超声局部温度升高所致，优化超声控制，你可以控制单次超声秒数及频率和总时长，同时可以上冰浴；如果没有明确无需洗涤，活化前可能需要洗球，去除杂质及多余的表面活性剂；活化时间不易过长；MES缓冲液适合洗涤及活化，PH不适合偶联，需要按照7.4的PH基础去优化偶联缓冲液，但该PH及以上条件下羧基活化中间体不稳定，所以也就没必要过夜，37℃摇床偶联1小时左右即可，封闭后的微球保存液也一样要合适，可以维持标记物稳定 |
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流氓额怕水4楼2022-05-24 15:25:46
