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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 学术交流 » 羧基聚苯乙烯微球表面抗体修饰
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流氓额怕水

新虫 (小有名气)

[交流] 羧基聚苯乙烯微球表面抗体修饰 已有3人参与

请问大家是怎么在微球表面进行抗体修饰的呀？我是在在MES缓冲液中加入100μl 羧基修饰的PS球，然后用EDC/NHS进行活化处理，洗球后在加入0.5mg/ml的单抗，4℃保存一夜。但是后面检测蛋白并没有信号感觉是抗体没有修饰上去，不知道有没有大佬做过类似的修饰，还请帮助
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1楼 2022-05-21 14:26:57
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流氓额怕水

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaim1234 at 2022-05-24 10:42:28
字面意思，4℃偶联？离心后有没有超声？没有淬灭/封闭？描述太简单，详细流程

太谢谢你的回复。我是在加入抗体后在4℃进行偶联一夜，离心后没有进行超声，因为怕超声会把抗体破坏掉。封闭的步骤是最后加入1ml 1%BSA进行的
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3楼2022-05-24 13:45:01
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zhaim1234

银虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
字面意思，4℃偶联？离心后有没有超声？没有淬灭/封闭？描述太简单，详细流程
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2楼2022-05-24 10:42:28
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zhaim1234

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般常规抗体偶联不需要4℃，除非你的微球供应商操作手册有明确要求；每步离心后需要充分再悬浮，保证微球的分散状态，普通振荡或涡旋达不到需求，量少水浴超声分散，量多要上超声设备了，所谓破坏抗体情况多在于超声局部温度升高所致，优化超声控制，你可以控制单次超声秒数及频率和总时长，同时可以上冰浴；如果没有明确无需洗涤，活化前可能需要洗球，去除杂质及多余的表面活性剂；活化时间不易过长；MES缓冲液适合洗涤及活化，PH不适合偶联，需要按照7.4的PH基础去优化偶联缓冲液，但该PH及以上条件下羧基活化中间体不稳定，所以也就没必要过夜，37℃摇床偶联1小时左右即可，封闭后的微球保存液也一样要合适，可以维持标记物稳定
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流氓额怕水
4楼2022-05-24 15:25:46
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流氓额怕水

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaim1234 at 2022-05-24 15:25:46
一般常规抗体偶联不需要4℃，除非你的微球供应商操作手册有明确要求；每步离心后需要充分再悬浮，保证微球的分散状态，普通振荡或涡旋达不到需求，量少水浴超声分散，量多要上超声设备了，所谓破坏抗体情况多在于超 ...

太感谢您啦，您提到的许多细节是我没注意到的，我后面在根据这个稍微改一下我的修饰方案，然后再试一下。另外我还想问一下就是对于加入EDC/sulfo-NHS半分钟后发现羧基PS球沿着离心管壁向上分散，这是属于正常现象吗？对于EDC/NHS以及抗体的加入一般是直接用磁子边搅拌边加入，还是直接加入后振荡分散即可呢？
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5楼2022-05-24 15:50:26
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