应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 学术交流 » 羧基聚苯乙烯微球表面抗体修饰
51/1返回列表
查看: 2604  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

流氓额怕水

新虫 (小有名气)

[交流] 羧基聚苯乙烯微球表面抗体修饰 已有3人参与

请问大家是怎么在微球表面进行抗体修饰的呀？我是在在MES缓冲液中加入100μl 羧基修饰的PS球，然后用EDC/NHS进行活化处理，洗球后在加入0.5mg/ml的单抗，4℃保存一夜。但是后面检测蛋白并没有信号感觉是抗体没有修饰上去，不知道有没有大佬做过类似的修饰，还请帮助
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-05-21 14:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaim1234

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般常规抗体偶联不需要4℃，除非你的微球供应商操作手册有明确要求；每步离心后需要充分再悬浮，保证微球的分散状态，普通振荡或涡旋达不到需求，量少水浴超声分散，量多要上超声设备了，所谓破坏抗体情况多在于超声局部温度升高所致，优化超声控制，你可以控制单次超声秒数及频率和总时长，同时可以上冰浴；如果没有明确无需洗涤，活化前可能需要洗球，去除杂质及多余的表面活性剂；活化时间不易过长；MES缓冲液适合洗涤及活化，PH不适合偶联，需要按照7.4的PH基础去优化偶联缓冲液，但该PH及以上条件下羧基活化中间体不稳定，所以也就没必要过夜，37℃摇床偶联1小时左右即可，封闭后的微球保存液也一样要合适，可以维持标记物稳定
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

流氓额怕水
4楼2022-05-24 15:25:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

zhaim1234

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
字面意思，4℃偶联？离心后有没有超声？没有淬灭/封闭？描述太简单，详细流程
赞一下 回复此楼
2楼2022-05-24 10:42:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流氓额怕水

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaim1234 at 2022-05-24 10:42:28
字面意思，4℃偶联？离心后有没有超声？没有淬灭/封闭？描述太简单，详细流程

太谢谢你的回复。我是在加入抗体后在4℃进行偶联一夜，离心后没有进行超声，因为怕超声会把抗体破坏掉。封闭的步骤是最后加入1ml 1%BSA进行的
赞一下 回复此楼
3楼2022-05-24 13:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流氓额怕水

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaim1234 at 2022-05-24 15:25:46
一般常规抗体偶联不需要4℃，除非你的微球供应商操作手册有明确要求；每步离心后需要充分再悬浮，保证微球的分散状态，普通振荡或涡旋达不到需求，量少水浴超声分散，量多要上超声设备了，所谓破坏抗体情况多在于超 ...

太感谢您啦，您提到的许多细节是我没注意到的，我后面在根据这个稍微改一下我的修饰方案，然后再试一下。另外我还想问一下就是对于加入EDC/sulfo-NHS半分钟后发现羧基PS球沿着离心管壁向上分散，这是属于正常现象吗？对于EDC/NHS以及抗体的加入一般是直接用磁子边搅拌边加入，还是直接加入后振荡分散即可呢？
赞一下 回复此楼
5楼2022-05-24 15:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +5 且听虎啸 2026-08-17 6/300 2026-08-22 19:09 by 超级无敌华子
[基金申请] 什么时候开奖？ +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭