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96孔板样巨噬细胞并给药
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各位大佬，我最近在做elisa试验，需要测给药后巨噬细胞的培养基里的细胞因子，但是重复性一直不好，后来就整个过程找原因。 我是种板24h，然后就吸干培养基里的培养液，再加100微升的pbs洗一遍，弃去之后加稀释了药物的空白培养基。过程当中用到的所有溶液都在37度预热，但是我给完药之后发现很多细胞都飘起来了，第二天再来看（我需要给药24h）细胞状态也不是很好。 我就猜测我在换液这一步就对细胞造成了影响，看了一下其他的贴子，我就试了一下先只弃掉50微升的培养液，不吸干（原来是100微升种的板），然后再加入200微升的pbs清洗一次，再弃去200微升，再加200微升的pbs清洗，反复三到四次，这样我洗完之后确实是细胞没有飘起来。但是我最后又剩了50微的pbs在里面，我如果吸干再给药也还是会飘起来。 所以我现在就只想到把pbs直接换成空白培养基来洗，这样最后剩下的50微就是空白培养基，然后我再把我的药物配成成50微的双倍浓度加进去。 可是这样又面临一些问题： 1.我反复洗这么多次，最后孔里剩下的溶液肯定和50微是有误差的， 2.我50微药物加到具有50微培养基的孔里，药物最后是否可以均匀分布，但是我又不敢在孔里混匀 3.这样洗对溶液的消耗实在是太大了  请问大家对这些问题有什么建议吗 感激不尽 |
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