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请教关于Northern blot 中需要注意的 环节
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最近刚开始做Northern blot准备 所用的试剂盒是Dig DNA Labeling and Detection kit cat.No.11093657910 对于其中的一些操作还是有些不清楚,请大家指教: part1:首先是RNA电泳 这个步骤中所需要的电泳缓冲液,上样缓冲液,在配制的时候是不是必须都用灭菌的DEPC水处理过, 就是配制的时候先把瓶子,量筒,烧杯,玻璃棒烘好,DEPC水灭好,再进行配制? 还有电泳槽和制胶的东西是怎么处理的? Part2:转膜 变性后的RNA进行转膜就不需要像southern一样变性,中和了,转膜的时候,胶是和尼龙膜紧密接触的,那么尼龙膜,whatmann滤纸需要去除RNAase么?紫外交联后还要继续防止降解么? part3:杂交与显影 我用的探针是DNA探针,后面的操作是否就如southern ? [ Last edited by 350784478 on 2009-9-9 at 09:22 ] |
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