应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教关于Northern blot 中需要注意的 环节
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 741  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

lxjwishes

银虫 (正式写手)

[交流] 请教关于Northern blot 中需要注意的 环节

最近刚开始做Northern blot准备
所用的试剂盒是Dig DNA Labeling and Detection kit
cat.No.11093657910

对于其中的一些操作还是有些不清楚，请大家指教：
part1：首先是RNA电泳
这个步骤中所需要的电泳缓冲液，上样缓冲液，在配制的时候是不是必须都用灭菌的DEPC水处理过，
就是配制的时候先把瓶子，量筒，烧杯，玻璃棒烘好，DEPC水灭好，再进行配制？
还有电泳槽和制胶的东西是怎么处理的？

Part2：转膜
变性后的RNA进行转膜就不需要像southern一样变性，中和了，转膜的时候，胶是和尼龙膜紧密接触的，那么尼龙膜，whatmann滤纸需要去除RNAase么？紫外交联后还要继续防止降解么？

part3：杂交与显影
我用的探针是DNA探针，后面的操作是否就如southern ？

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-9 at 09:22 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
pleasemywings,flymeaway.
1楼 2009-09-08 16:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)
★ ★
lxjwishes(金币+1):谢谢参与
lxjwishes(金币+1,VIP+0): 10-14 10:13
part1 就是那么配置的，电泳槽和制胶好好用去污剂刷刷，没问题的
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2009-09-09 01:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
lxjwishes(金币+1,VIP+0): 10-14 10:13
Part2：转膜
不用变性吧，RNA单链，在20*SSC洗洗就好了，尼龙膜，whatmann滤纸不需要去除RNAase的（也没法除的，呵呵），交联以后就安全多了，不用特别注意了
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-09 01:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
lxjwishes(金币+1,VIP+0): 10-14 10:14
part3：杂交与显影
这一步完全如southern了
赞一下 回复此楼
4楼2009-09-09 01:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhlxhl

木虫 (正式写手)
★
lxjwishes(金币+1,VIP+0):谢谢 9-13 19:44
补充part1 ：有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-09 01:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lxjwishes 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 人工智能320调剂08工类还有机会吗 +18 振—TZ 2026-04-10 19/950 2026-04-14 10:34 by screening
[考研] 求调剂 +15 雪逢冬 2026-04-10 15/750 2026-04-14 08:47 by 木木mumu～
[考研] 机械还有还有名额吗？太难了 +8 笑笑袁 2026-04-10 8/400 2026-04-14 08:44 by screening
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线，领导幸灾乐祸，教师遭殃恐 +3 qut2026 2026-04-11 7/350 2026-04-12 20:24 by qut2026
[考研] 求调剂，262机械专硕 +8 嗯yyl 2026-04-08 8/400 2026-04-12 02:31 by 秋豆菜芽
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 281求调剂 +11 觉得好的吧 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:35 by 逆水乘风
[考研] 一志愿211，化学310分，本科重点双非，求调剂 +23 努力奋斗112 2026-04-08 23/1150 2026-04-10 23:29 by 314126402
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 化学工程与技术专业一志愿哈工程 291分B区 国家级大创负责人 有一作论文 +13 Emmy~ 2026-04-09 13/650 2026-04-09 14:47 by only周
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂，接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 277、学硕，求调剂 数一104， +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 313求调剂 +3 十六拾陆 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:20 by lbsjt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭