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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关IPTG诱导的相关问题
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天兆9611

铁虫 (小有名气)

[求助] 有关IPTG诱导的相关问题 已有1人参与

有关于诱导的问题一直有问题不明白想请教各位。
1.诱导前先将菌液培养至OD大约0.5左右后能否先放入4°里存放，待到需要诱导时取出加入IPTG再做诱导可以吗？
2.诱导完成后可以先将菌体离心后收集菌体，放入4°中暂存，过段时间后再加入缓冲液再破碎可以吗？

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懵懂的小白
1楼 2022-04-24 08:51:41
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
天兆9611: 金币+10, ★★★很有帮助 2022-04-24 19:53:07
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢？
关于第一个问题：菌诱导后到达0.5，正处于对数期是比较有活力的，放在4°C后因为低温会导致菌活下降，那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题：诱导之后离心加缓冲液破碎放在4°C会比较好，如果直接离心菌体，菌自身蛋白酶可能会你的目的蛋白降解。
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2楼2022-04-24 11:07:59
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天兆9611

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2022-04-24 11:07:59
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢？
关于第一个问题：菌诱导后到达0.5，正处于对数期是比较有活力的，放在4°C后因为低温会导致菌活下降，那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题：诱导之后离心加缓冲液破 ...

因为自己实验室没有全温摇床，需要外面借，连细胞破碎仪都要借，所以才暂存。

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懵懂的小白
3楼2022-04-24 11:18:36
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天兆9611

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2022-04-24 11:07:59
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢？
关于第一个问题：菌诱导后到达0.5，正处于对数期是比较有活力的，放在4°C后因为低温会导致菌活下降，那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题：诱导之后离心加缓冲液破 ...

那离心后菌体放在负20°可以吗

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懵懂的小白
4楼2022-04-24 11:50:57
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by 天兆9611 at 2022-04-24 11:50:57
那离心后菌体放在负20°可以吗
...

可以的，有些提取步骤就是反复冻融。把菌液离心，只保留菌体冻-20，之后再裂解破碎。

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5楼2022-04-25 09:59:53
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