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天兆9611

铁虫 (小有名气)

[求助] 有关IPTG诱导的相关问题 已有1人参与

有关于诱导的问题一直有问题不明白想请教各位。
1.诱导前先将菌液培养至OD大约0.5左右后能否先放入4°里存放,待到需要诱导时取出加入IPTG再做诱导可以吗?
2.诱导完成后可以先将菌体离心后收集菌体,放入4°中暂存,过段时间后再加入缓冲液再破碎可以吗?

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懵懂的小白
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渊博震天

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Yeast Display

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
天兆9611: 金币+10, ★★★很有帮助 2022-04-24 19:53:07
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢?
关于第一个问题:菌诱导后到达0.5,正处于对数期是比较有活力的,放在4°C后因为低温会导致菌活下降,那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题:诱导之后离心加缓冲液破碎放在4°C会比较好,如果直接离心菌体,菌自身蛋白酶可能会你的目的蛋白降解。
2楼2022-04-24 11:07:59
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天兆9611

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2022-04-24 11:07:59
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢?
关于第一个问题:菌诱导后到达0.5,正处于对数期是比较有活力的,放在4°C后因为低温会导致菌活下降,那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题:诱导之后离心加缓冲液破 ...

因为自己实验室没有全温摇床,需要外面借,连细胞破碎仪都要借,所以才暂存。

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懵懂的小白
3楼2022-04-24 11:18:36
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天兆9611

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 渊博震天 at 2022-04-24 11:07:59
为什么不趁着新鲜的时候诱导和离心破碎呢?
关于第一个问题:菌诱导后到达0.5,正处于对数期是比较有活力的,放在4°C后因为低温会导致菌活下降,那么可能就会影响诱导结果。
第二个问题:诱导之后离心加缓冲液破 ...

那离心后菌体放在负20°可以吗

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懵懂的小白
4楼2022-04-24 11:50:57
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

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引用回帖:
4楼: Originally posted by 天兆9611 at 2022-04-24 11:50:57
那离心后菌体放在负20°可以吗
...

可以的,有些提取步骤就是反复冻融。把菌液离心,只保留菌体冻-20,之后再裂解破碎。

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5楼2022-04-25 09:59:53
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