24小时热门版块排行榜    

查看: 937  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图,图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA,跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系:0.5ulDNA模板,0.3ul引物,2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数:预变性94,7min,在80度暂停了5min。变性94度,30s,退火53度(上海生工给的Tm值),延伸72度,2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验,所以都不太懂,请教大家我的实验中DNA有扩增吗?图中可以看出什么呢?(补充,由于PCR仪的缘故,在预变性后,实验停止,第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验)

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:07 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxx41

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我遇到过PCR中途停止的啊,就是被人把PCR仪的电线给拔了……
最好还是连续做啊,拖尾确实太严重,而且3,11,12的加样孔都有很亮的条带,你的目的条带到底多大啊?
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
5楼2009-09-09 22:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

hywang131

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-16 17:07
图中的第9个点样孔能看到DNA有扩增出来。
其它的拖尾太严重了,几乎看不出来扩增片段,这个有很多原因造成(1.酶量过多;2模板不纯;3退火温度偏低;4循环过多等),一般的PCR反应过程28-32个循环就可以了。
我个人的实验经验得知,一般从生工拿回的合成引物,退火温度要比生工的低5度,在这个范围试着摸一下最适温度吧。
2楼2009-09-09 16:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火53度 上海生工给的Tm值 降低一点
海纳百川止于至善
3楼2009-09-09 17:35:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

拖尾太严重 我做过好多次没遇到 肯让那个由于你中途停止过有关
海纳百川止于至善
4楼2009-09-09 17:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 7lpolszZVXgi 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:08 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] filecode +6 cratir 2026-08-14 10/500 2026-08-14 18:29 by 笑叹辞穷
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见