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汕头大学海洋科学接受调剂
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xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图,图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA,跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系:0.5ulDNA模板,0.3ul引物,2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数:预变性94,7min,在80度暂停了5min。变性94度,30s,退火53度(上海生工给的Tm值),延伸72度,2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验,所以都不太懂,请教大家我的实验中DNA有扩增吗?图中可以看出什么呢?(补充,由于PCR仪的缘故,在预变性后,实验停止,第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验)

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:07 ]
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
退火53度 上海生工给的Tm值 降低一点
海纳百川止于至善
3楼2009-09-09 17:35:10
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hywang131

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-16 17:07
图中的第9个点样孔能看到DNA有扩增出来。
其它的拖尾太严重了,几乎看不出来扩增片段,这个有很多原因造成(1.酶量过多;2模板不纯;3退火温度偏低;4循环过多等),一般的PCR反应过程28-32个循环就可以了。
我个人的实验经验得知,一般从生工拿回的合成引物,退火温度要比生工的低5度,在这个范围试着摸一下最适温度吧。
2楼2009-09-09 16:40:53
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

拖尾太严重 我做过好多次没遇到 肯让那个由于你中途停止过有关
海纳百川止于至善
4楼2009-09-09 17:37:09
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yxx41

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我遇到过PCR中途停止的啊,就是被人把PCR仪的电线给拔了……
最好还是连续做啊,拖尾确实太严重,而且3,11,12的加样孔都有很亮的条带,你的目的条带到底多大啊?
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
5楼2009-09-09 22:37:43
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