应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教电泳图
71/1返回列表
查看: 832  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图，图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA，跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系：0.5ulDNA模板，0.3ul引物，2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数：预变性94，7min，在80度暂停了5min。变性94度，30s，退火53度（上海生工给的Tm值），延伸72度，2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验，所以都不太懂，请教大家我的实验中DNA有扩增吗？图中可以看出什么呢？（补充，由于PCR仪的缘故，在预变性后，实验停止，第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验）

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:07 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-07 15:15:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hywang131

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-16 17:07
图中的第9个点样孔能看到DNA有扩增出来。
其它的拖尾太严重了，几乎看不出来扩增片段，这个有很多原因造成（1.酶量过多；2模板不纯；3退火温度偏低；4循环过多等），一般的PCR反应过程28-32个循环就可以了。
我个人的实验经验得知，一般从生工拿回的合成引物，退火温度要比生工的低5度，在这个范围试着摸一下最适温度吧。
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-09-09 16:40:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火53度 上海生工给的Tm值 降低一点
赞一下(1人) 回复此楼
海纳百川止于至善
3楼2009-09-09 17:35:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
拖尾太严重 我做过好多次没遇到 肯让那个由于你中途停止过有关
赞一下 回复此楼
海纳百川止于至善
4楼2009-09-09 17:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxx41

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我遇到过PCR中途停止的啊，就是被人把PCR仪的电线给拔了……
最好还是连续做啊，拖尾确实太严重，而且3，11，12的加样孔都有很亮的条带，你的目的条带到底多大啊？
赞一下(1人) 回复此楼
内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
5楼2009-09-09 22:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang6871

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不明白你的目的片段在哪里，俨然是ladder，好好看看到底哪里出问题了吧
赞一下(1人) 回复此楼
过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
6楼2009-09-09 23:33:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaowenying

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的摸板浓度是不是很大   摸板加多了也会出现很多问题
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-09-10 19:17:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xihanlianz 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +5 硕星赴 2026-03-23 5/250 2026-03-24 17:09 by hello七七
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 085602 289分求调剂 +4 WWW西西弗斯 2026-03-24 4/200 2026-03-24 16:13 by 星空星月
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 7/350 2026-03-24 15:24 by cuifj
[考研] 生物学学硕求调剂 +6 小羊睡着了? 2026-03-23 6/300 2026-03-24 13:22 by 李常安
[考研] 材料与化工328分调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-23 4/200 2026-03-24 11:03 by 544594351
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 材料调剂 +5 匹克i 2026-03-23 5/250 2026-03-24 08:50 by dick_runner
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +11 Ymlll 2026-03-18 15/750 2026-03-20 19:40 by 丁丁*
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭