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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教电泳图
汕头大学海洋科学接受调剂
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xihanlianz

银虫 (正式写手)

[交流] 请教电泳图

请大家帮我看看PCR电泳图，图中有两条Marker。
模板取自植物基因组的DNA，跑电泳时有拖尾现象。

我的pcr体系：0.5ulDNA模板，0.3ul引物，2.0ul10*buffer, 1.5mM MgCl2, 0.15mMdNTPs, 1U taq酶。

循环参数：预变性94，7min，在80度暂停了5min。变性94度，30s，退火53度（上海生工给的Tm值），延伸72度，2min。总共40个循环。最后72度延伸7min。


我刚开始做PCR实验，所以都不太懂，请教大家我的实验中DNA有扩增吗？图中可以看出什么呢？（补充，由于PCR仪的缘故，在预变性后，实验停止，第二天的时候又重新拿原来的溶液做的实验）

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-16 at 17:07 ]
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1楼 2009-09-07 15:15:49
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hywang131

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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350784478(金币+2,VIP+0):谢谢参与 9-16 17:07
图中的第9个点样孔能看到DNA有扩增出来。
其它的拖尾太严重了，几乎看不出来扩增片段，这个有很多原因造成（1.酶量过多；2模板不纯；3退火温度偏低；4循环过多等），一般的PCR反应过程28-32个循环就可以了。
我个人的实验经验得知，一般从生工拿回的合成引物，退火温度要比生工的低5度，在这个范围试着摸一下最适温度吧。
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2楼2009-09-09 16:40:53
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
退火53度 上海生工给的Tm值 降低一点
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海纳百川止于至善
3楼2009-09-09 17:35:10
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
拖尾太严重 我做过好多次没遇到 肯让那个由于你中途停止过有关
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海纳百川止于至善
4楼2009-09-09 17:37:09
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yxx41

金虫 (小有名气)
★
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我遇到过PCR中途停止的啊，就是被人把PCR仪的电线给拔了……
最好还是连续做啊，拖尾确实太严重，而且3，11，12的加样孔都有很亮的条带，你的目的条带到底多大啊？
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
5楼2009-09-09 22:37:43
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zhang6871

银虫 (正式写手)
★
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看不明白你的目的片段在哪里，俨然是ladder，好好看看到底哪里出问题了吧
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过于功利，浮躁，布满灰尘的心都是创新的杀手!多记，心静，多动手，贴近大自然!
6楼2009-09-09 23:33:00
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gaowenying

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的摸板浓度是不是很大   摸板加多了也会出现很多问题
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7楼2009-09-10 19:17:22
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