24小时热门版块排行榜    

查看: 553  |  回复: 6
当前主题已经存档。

xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 酶切难题

最近构建的重组载体5200左右,先用BamHI切如图,最亮带大小在5000-6000之间,应该是构建成功,而后用SalI切想回收目的片段,目的片段和质粒大小都2600左右,理论上应该在2600左右出现一条带,可是我切完之后怎么在4000左右出现了一条带且只有这一条带(无图)。
另外我把重组载体用BamHI和SalI同时双酶切,如2图所示,也应该是2600左右两条带(重合),怎么图是那样子?(2图marker中最亮带3000,上面4000,下面2500)
请高手帮忙,不胜感激!

[ Last edited by xiangao on 2009-9-6 at 21:32 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

文字说明呢
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-09-06 21:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

不知道问题出在哪?双酶切那图最亮带4000左右了,下面那条难道是目的带(2600左右)?怎么会出现三条带?没切开吗?还是本来载体构建出了问题?
从第一张图单酶切看,好像载体大小5000-6000之间,大小是对的啊!
3楼2009-09-06 21:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

上面只是克隆了一段目的基因,双酶切后还要连到表达载体上,这可怎么连啊?都切不对
4楼2009-09-06 21:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

麻烦帮忙
5楼2009-09-06 22:05:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银杏下

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果我没猜错的话应该是在你的目的基因上有BamHI酶切位点,而且这个酶切位点应该是在目的基因的中间1000-1500之间,图1中很明显说明不只一个BamHI酶切位点,图2则说明在酶切不完全的情况下,一部分被切开,另一部分没有切开,仍然较大。当然这只是我的猜测,我建议你降低质粒浓度(依图中看至少要降3倍)再酶切看看,因为你这图酶切质粒浓度太高,酶切不完全,所以很难断定。
6楼2009-09-06 23:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

谢谢!不过就一个BamHI酶切位点,是我设计引物时加上的(另外还加了个SalI)目的想把它切下来。切下来之后两个片段都2600左右,可现在图上切的大小都不对,而且有杂带。
7楼2009-09-07 08:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiangao 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +25 医学老男孩 2026-08-13 52/2600 2026-08-15 11:49 by 大快人心啦
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +4 archvillain 2026-08-15 7/350 2026-08-15 11:44 by archvillain
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[基金申请] filecode +7 cratir 2026-08-14 11/550 2026-08-15 06:19 by 学员8dgXkO
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 4/200 2026-08-15 04:17 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见