24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 459  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 酶切难题

最近构建的重组载体5200左右,先用BamHI切如图,最亮带大小在5000-6000之间,应该是构建成功,而后用SalI切想回收目的片段,目的片段和质粒大小都2600左右,理论上应该在2600左右出现一条带,可是我切完之后怎么在4000左右出现了一条带且只有这一条带(无图)。
另外我把重组载体用BamHI和SalI同时双酶切,如2图所示,也应该是2600左右两条带(重合),怎么图是那样子?(2图marker中最亮带3000,上面4000,下面2500)
请高手帮忙,不胜感激!

[ Last edited by xiangao on 2009-9-6 at 21:32 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

银杏下

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果我没猜错的话应该是在你的目的基因上有BamHI酶切位点,而且这个酶切位点应该是在目的基因的中间1000-1500之间,图1中很明显说明不只一个BamHI酶切位点,图2则说明在酶切不完全的情况下,一部分被切开,另一部分没有切开,仍然较大。当然这只是我的猜测,我建议你降低质粒浓度(依图中看至少要降3倍)再酶切看看,因为你这图酶切质粒浓度太高,酶切不完全,所以很难断定。
6楼2009-09-06 23:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

xiangao

金虫 (正式写手)

不知道问题出在哪?双酶切那图最亮带4000左右了,下面那条难道是目的带(2600左右)?怎么会出现三条带?没切开吗?还是本来载体构建出了问题?
从第一张图单酶切看,好像载体大小5000-6000之间,大小是对的啊!
3楼2009-09-06 21:46:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

上面只是克隆了一段目的基因,双酶切后还要连到表达载体上,这可怎么连啊?都切不对
4楼2009-09-06 21:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)

谢谢!不过就一个BamHI酶切位点,是我设计引物时加上的(另外还加了个SalI)目的想把它切下来。切下来之后两个片段都2600左右,可现在图上切的大小都不对,而且有杂带。
7楼2009-09-07 08:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求助调剂,跨调 +18 X十甫寸Y 2026-04-11 19/950 2026-04-14 19:26 by Art1977
[考研] 367求调剂 +11 hffQAQ 2026-04-09 11/550 2026-04-14 17:48 by lhj2009
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +7 lzmk 2026-04-14 7/350 2026-04-14 17:02 by lihaoda1994
[考研] 271求调剂 +29 2261744733 2026-04-11 29/1450 2026-04-14 16:48 by zhouxiaoyu
[考研] 26药学专硕105500求调剂 +6 喽哈加油 2026-04-13 6/300 2026-04-14 16:40 by zhouxiaoyu
[考研] 复试调剂 +18 积极向上; 2026-04-10 20/1000 2026-04-14 16:11 by zs92450
[考研] 考研求调剂 +6 ban班小七 2026-04-11 6/300 2026-04-14 14:06 by 哆啦A梦只是个梦
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 初试261 +3 Asht少 2026-04-10 6/300 2026-04-10 16:38 by Asht少
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
[考研] 348求调剂 +3 candyyyi 2026-04-09 3/150 2026-04-09 17:20 by 段伟艳
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
信息提示
请填处理意见