应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆表达问题
251/3返回列表123下一页
查看: 1201  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆表达问题

把一段目的基因插入到克隆载体pUC18上，验证已经插上。然后再把这段目的基因切下来，连到表达载体pET系列载体上，问题是目的基因片段与切下来的pUC18差不多大，都2600左右，我怎么把它和pET连接啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-05 15:59:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司马诸葛

木虫 (正式写手)
我还没开始做实验，帮顶一下吧，顺便学习一下！
赞一下 回复此楼
2楼2009-09-05 16:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
请大家帮助
回复此楼
3楼2009-09-05 16:33:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
xiangao(金币+1,VIP+0): 9-5 17:25
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 20:07
一般你合成目的片度时要在其中一段开头加上两个酶切位点，插入克隆载体时用外面一个，插入表达载体时用另一种酶切，这样就行了！
赞一下(12人) 回复此楼
砖石王老三！！！
4楼2009-09-05 17:09:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 9-5 17:30
呵呵，那就加梅切引物位点，设计引物PCR,然后PCR产物酶切，再连pET载体吧，片

段一样大，可真不好区分。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-09-05 17:12:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 20:08
是这样做的，为了克隆，不过设计酶切位点连到pUC上了，现在想把它再切下来，连到pET上，现在问题就是切的目的片段和pUC差不多大，怎么才能回收克隆的目的片段？
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2009-09-05 17:30:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qgaoamtf

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
xiangao(金币+3,VIP+0): 9-5 18:12
三酶切，其中两个是克隆用的，第三个是切碎pUC载体（目的基因应无此位点）。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2009-09-05 17:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
xiangao(金币+2,VIP+0): 9-5 18:14
引用回帖:
Originally posted by xiangao at 2009-9-5 17:30:
是这样做的，为了克隆，不过设计酶切位点连到pUC上了，现在想把它再切下来，连到pET上，现在问题就是切的目的片段和pUC差不多大，怎么才能回收克隆的目的片段？

不需要回收，直接连接，然后转化大肠杆菌涂板过夜，通过菌落PCR筛选阳性克隆，引物为你扩增此片段的引物，
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-09-05 17:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-9-5 17:38:

不需要回收，直接连接，然后转化大肠杆菌涂板过夜，通过菌落PCR筛选阳性克隆，引物为你扩增此片段的引物，

我也想过这样做，不过那样做工作量肯定很大，太多的假阳性
赞一下 回复此楼
9楼2009-09-05 18:15:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangao

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qgaoamtf at 2009-9-5 17:37:
三酶切，其中两个是克隆用的，第三个是切碎pUC载体（目的基因应无此位点）。

和我师兄建议的一样，不过目的基因上没有的，恰好在puc片段上的酶切位点，很稀少  而且是不常见的，我们实验室没有那种酶
赞一下 回复此楼
10楼2009-09-05 18:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiangao 的主题更新
251/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:22 by 7huP8NPKZCp9
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 18:10 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 9/450 2026-08-15 17:46 by 7huP8NPKZCp9
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +7 majunge000 2026-08-11 9/450 2026-08-15 13:34 by kiz2011
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:45 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭