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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆表达问题
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xiangao

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆表达问题

把一段目的基因插入到克隆载体pUC18上，验证已经插上。然后再把这段目的基因切下来，连到表达载体pET系列载体上，问题是目的基因片段与切下来的pUC18差不多大，都2600左右，我怎么把它和pET连接啊？
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1楼 2009-09-05 15:59:44
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
xiangao(金币+1,VIP+0): 9-5 17:30
呵呵，那就加梅切引物位点，设计引物PCR,然后PCR产物酶切，再连pET载体吧，片

段一样大，可真不好区分。
赞一下(2人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2009-09-05 17:12:39
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司马诸葛

木虫 (正式写手)
我还没开始做实验，帮顶一下吧，顺便学习一下！
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2楼2009-09-05 16:06:20
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
xiangao(金币+1,VIP+0): 9-5 17:25
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 20:07
一般你合成目的片度时要在其中一段开头加上两个酶切位点，插入克隆载体时用外面一个，插入表达载体时用另一种酶切，这样就行了！
赞一下(12人) 回复此楼
砖石王老三！！！
4楼2009-09-05 17:09:12
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xiangao

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 9-5 20:08
是这样做的，为了克隆，不过设计酶切位点连到pUC上了，现在想把它再切下来，连到pET上，现在问题就是切的目的片段和pUC差不多大，怎么才能回收克隆的目的片段？
赞一下(10人) 回复此楼
6楼2009-09-05 17:30:07
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