| 查看: 559 | 回复: 5 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
still2008至尊木虫 (著名写手)
破碎世界的守护者
|
[交流]
微卫星筛选——转化质粒不成功
|
||
|
SSR大量扩增之后经GenClean PCR产物回收试剂盒（上海捷锐）纯化后经琼脂糖检测条带集中在300-1000之间， 载体连接体系： 总体积： 5 uL 纯化产物 2 uL PMD-18-T载体（TAKARA） 0.5 uL solution I 2.5 uL 16℃连接过夜。 转化的感受态细胞为——第一次用的是隔壁实验室自制，第二次用的是TAKARA公司，两次都长不多，一板仅有几个菌落。 问题何在，请赐教。 [ Last edited by still2008 on 2009-8-30 at 10:42 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有21人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有5人回复
-
国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率
已经有8人回复
-
各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。
已经有7人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有48人回复
-
filecode
已经有10人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有11人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有8人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有37人回复
-
好奇怪的filecode
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
still2008
至尊木虫 (著名写手)
破碎世界的守护者
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 10630.9
- 散金: 293
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 1377
- 在线: 131.5小时
- 虫号: 558303
- 注册: 2008-05-14
- 专业: 皮肤形态、结构和功能异常
6楼2009-09-15 14:30:55
brightfuture01
木虫之王 (文坛精英)
我爱打老虎
- BioEPI: 8
- 应助: 24 (小学生)
- 贵宾: 1.2
- 金币: 113343
- 散金: 1526
- 红花: 224
- 沙发: 1
- 帖子: 28965
- 在线: 3720.9小时
- 虫号: 464575
- 注册: 2007-11-21
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-30 12:41
still2008(金币+3,VIP+0):谢谢！不过我用的DNA不是回收，用的是磁珠富集法筛选SSR，直接切基因组DNA，所以您说的杂质应该不多吧？转化用的热激。 8-30 14:00
still2008(金币+3,VIP+0):虽然还是没做出来，还是再送你几个金币，:-) 9-15 14:41
amisking(金币+4,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-30 12:41
still2008(金币+3,VIP+0):谢谢！不过我用的DNA不是回收，用的是磁珠富集法筛选SSR，直接切基因组DNA，所以您说的杂质应该不多吧？转化用的热激。 8-30 14:00
still2008(金币+3,VIP+0):虽然还是没做出来，还是再送你几个金币，:-) 9-15 14:41
|
你的片段范围有点广，不妨分开来回收，300-600，600-1000这样来回收，然后分别 连接。这样计算摩尔浓度的时候相对更准确些。最后的转化不知道你是点转化还是热 激转化，可以试试你用的之外的另一种。转化后一定要用SOC摇菌一小时，不要用 LB。我的经验也就这么多了，祝好运。 落下一点，不妨扩大连接体系至10ul，因为你的切胶量肯定不少，所以你的最后 DNA片段难免会残留比较多的杂质，你的连接体系小的话，杂质浓度相对来说比较 高，可能影响连接效果。 [ Last edited by brightfuture01 on 2009-8-30 at 10:57 ] |
2楼2009-08-30 10:54:53
shenye.judy
木虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 2350.7
- 红花: 1
- 帖子: 501
- 在线: 53.7小时
- 虫号: 310766
- 注册: 2006-12-24
- 性别: MM
- 专业: 植物遗传学
3楼2009-08-30 12:28:32
still2008
至尊木虫 (著名写手)
破碎世界的守护者
- 应助: 21 (小学生)
- 金币: 10630.9
- 散金: 293
- 红花: 6
- 沙发: 1
- 帖子: 1377
- 在线: 131.5小时
- 虫号: 558303
- 注册: 2008-05-14
- 专业: 皮肤形态、结构和功能异常
4楼2009-08-30 14:17:48
