| 查看: 1435 | 回复: 11 | |||
| 当前主题已经存档。 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
huangqihong铁虫 (小有名气)
|
[交流]
如何用乙醇沉淀酶切产物
|
||
| 请教一下，质粒酶切后想用乙醇沉淀的方法回收DNA该如何操作？ |
回复此楼» 猜你喜欢
时间戳又变了8-15
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有52人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有5人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
filecode
已经有11人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有5人回复
★ ★ ★ ★ ★
huangqihong(金币+5,VIP+0):多谢！ 8-28 19:43
huangqihong(金币+5,VIP+0):多谢！ 8-28 19:43
|
首先，向酶切体系添加1/10体积浓度为3M的NaAc，混匀后，整个体系的Na+浓度就是0.3M（生理盐水的Na+浓度大约为0.15M）。这么多的Na+均匀地分散到DNA表面，屏蔽掉DNA链上PO4-的负电荷，有利于DNA链的压缩。否则的话，PO4-彼此排斥，DNA就不容易聚集。 接着，向整个体系添加2倍体积的无水乙醇。乙醇和水的互溶性很好，加进去后，乙醇就把DNA表面的水膜夺走。换句话说，水和乙醇混去了，原本溶解在水中的DNA只好被挤了出来。第一步加入的Na+平衡了PO4-的电荷，被挤出来的DNA就轻易堆积在一起了。 经过离心（12,000 rpm × 5 min），被挤出来的DNA就全部被甩到了离心管底部。把上清倒掉，剩下DNA。然而，这时的DNA不纯，还混有酶切体系留下来的盐分，以及变性了的酶。酶变性了，量也不多，不用清除。 向离心管中加入足够量的70%乙醇。这时候，既有足够的乙醇保证DNA不溶于水，又有足够的水把盐份从DNA沉淀里溶解出来。你可以选择短暂离心，或者静置1分钟，来溶解盐分。然后，去干净上清，这样剩下的DNA就不含多余的盐分等杂质，从而不会影响后续实验。 把沉淀烘干，最后用适量的水（或者TE溶液，tris保持弱碱性；EDTA螯合金属离子，抑制依赖于金属离子的DNAse；这样的DNA溶液质量更高）溶就可以了。 |
5楼2009-08-28 17:16:57
Anson1358
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6485.5
- 散金: 794
- 红花: 3
- 沙发: 19
- 帖子: 1153
- 在线: 676.4小时
- 虫号: 627110
- 注册: 2008-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2009-08-28 17:01:09
Anson1358
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6485.5
- 散金: 794
- 红花: 3
- 沙发: 19
- 帖子: 1153
- 在线: 676.4小时
- 虫号: 627110
- 注册: 2008-10-15
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
3楼2009-08-28 17:03:20
huangqihong
铁虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 7134.6
- 帖子: 142
- 在线: 192.1小时
- 虫号: 539305
- 注册: 2008-04-04
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2009-08-28 17:16:30
