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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 如何用乙醇沉淀酶切产物

请教一下,质粒酶切后想用乙醇沉淀的方法回收DNA该如何操作?
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 叔扬 at 2009-8-28 17:16:
首先,向酶切体系添加1/10体积浓度为3M的NaAc,混匀后,整个体系的Na+浓度就是0.3M(生理盐水的Na+浓度大约为0.15M)。这么多的Na+均匀地分散到DNA表面,屏蔽掉DNA链上PO4-的负电荷,有利于DNA链的压缩。否则的话 ...

这个好。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
10楼2009-08-29 11:33:31
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
huangqihong(金币+5,VIP+0):谢谢了 8-28 19:42
1、将酶切产物加水稀释的一定体积(如200微升),加1/10体积3M pH5.2 NaAc。
2、等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提,离心取上清。
3、加入2.5倍体积无水乙醇,摇匀后零下20度,放置10-30分钟
4、12000rpm离心10分钟。
5、70%乙醇洗涤两次。吹干,加水溶解
一个人可以不成功,但不可以不成长!
2楼2009-08-28 17:01:09
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

离心后很可能看不到沉淀。不过并不代表没有DNA。所以最后洗涤时要特别小心!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-08-28 17:03:20
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

怎么配制3M pH5.2 NaAc,用什么调pH值?-20度放置10-30分钟能完全沉淀DNA吗?4度过夜行不行?
4楼2009-08-28 17:16:30
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