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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 基因克隆测序结果不是目标基因
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Earlyli

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆测序结果不是目标基因 已有1人参与

最近在扩增植原体的多个基因，PCR能得到目标条带，但是测序结果总是比对到别的菌，大部分都是枯草芽孢杆菌，单菌落检测也是目标条带，酶用的taq酶，试着换过模板了，还是不行，目前用的模板都是经过16S rRNA基因检测是植原体的，但是其他基因就是克隆不出来，大半年了，快奔溃了，希望有人能给我指点指点，谢谢各位了
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1楼 2022-01-17 10:36:11
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abmbio

捐助贵宾 (初入文坛)
pcr的条带大小是否正确，是否存在非特异性的扩增，可以检查一下引物的特异性。
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11楼2022-02-21 14:39:01
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shuaibia6

金虫 (小有名气)
做克隆还有人用taq酶吗？
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2楼2022-01-17 11:24:18
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龙翔桥

新虫 (小有名气)
你的目的基因在genkank中有吗？可以直接下载下来，进行本地双序列比对的。

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3楼2022-01-17 11:36:57
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龙翔桥

新虫 (小有名气)
个人感觉哈，枯草芽孢杆菌的相关序列应该比你的序列在数据库中多很多的。。。

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4楼2022-01-17 11:37:56
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