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Earlyli

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆测序结果不是目标基因 已有1人参与

最近在扩增植原体的多个基因,PCR能得到目标条带,但是测序结果总是比对到别的菌,大部分都是枯草芽孢杆菌,单菌落检测也是目标条带,酶用的taq酶,试着换过模板了,还是不行,目前用的模板都是经过16S rRNA基因检测是植原体的,但是其他基因就是克隆不出来,大半年了,快奔溃了,希望有人能给我指点指点,谢谢各位了
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

做克隆还有人用taq酶吗?
2楼2022-01-17 11:24:18
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

你的目的基因在genkank中有吗?可以直接下载下来,进行本地双序列比对的。

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3楼2022-01-17 11:36:57
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

个人感觉哈,枯草芽孢杆菌的相关序列应该比你的序列在数据库中多很多的。。。

发自小木虫Android客户端
4楼2022-01-17 11:37:56
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snhajn

新虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-01-17 11:24:18
做克隆还有人用taq酶吗?

不然用啥

发自小木虫Android客户端
5楼2022-01-17 12:25:54
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by snhajn at 2022-01-17 12:25:54
不然用啥
...

我们公司提供高保真kod酶,错配率远低于taq,速度2000bp每分钟。可提供免费2*试用装。

发自小木虫Android客户端
6楼2022-01-17 13:24:29
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龙翔桥

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by snhajn at 2022-01-17 12:25:54
不然用啥
...

克隆常用pfu和kod。一般认为taq错配率高于前面两个,实验室常用来做菌落菌液鉴定,一般不用来克隆基因。

发自小木虫Android客户端
7楼2022-01-17 13:26:58
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fengxueren

新虫 (正式写手)

8楼2022-01-17 14:08:28
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elmanbio

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你先Blast一下你的引物吧,估计枯草芽孢杆菌可以匹配,那这个结果也就是不奇怪了
引物特异性的问题
9楼2022-01-18 10:22:36
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Earlyli

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-01-17 11:24:18
做克隆还有人用taq酶吗?

请问您平时都用什么酶
10楼2022-02-16 10:09:43
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