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恰好

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么BIFC能观察到蛋白互作LCA观察不到 已有1人参与

各位大牛,请教个蛋白互作的问题,有两个目的基因我们已经应用BIFC观察到明确互作,但是Luciferase Complementation Assay不管怎么优化条件就是看不到荧光呢?阳性对照能拍出来,也尝试在烟草中共转染了P19,都不行。请问有什么好的建议吗?先谢过!
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chiangscn

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 感谢回帖 2022-01-28 17:37:04
不同技术之间,结果上有不同、不一致,太正常不过,有很多原因,不细说,查文献就知。不然好期刊怎么会要求要用不同技术验证呢,体内体外的都要有的。否则,无法令人信服。BiFC与LCA属于同类技术,我们只用前者,而不用后者,因为前者可以看到互作的位置,而后者无法提供此类信息。应该考虑用Co-IP验证,至少用pull-down技术验证。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

wholaughslastlaughsbest
2楼2022-01-27 15:24:25
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恰好

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by chiangscn at 2022-01-27 15:24:25
不同技术之间,结果上有不同、不一致,太正常不过,有很多原因,不细说,查文献就知。不然好期刊怎么会要求要用不同技术验证呢,体内体外的都要有的。否则,无法令人信服。BiFC与LCA属于同类技术,我们只用前者,而 ...

收到,谢谢指导!
3楼2022-02-22 16:07:21
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4楼2022-02-23 10:35:31
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oylb2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 感谢应助 2022-06-05 17:01:08
BIFC具有一定的假阳性可能。就好比地铁上太拥挤的情况下,A与B本来不认识,结果被挤到了一起,产生了A与B手挨在一起的假象。BIFC时,瞬时表达水平不宜太高
5楼2022-05-26 22:16:44
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是个甜豆豆呀

新虫 (小有名气)

注意标签荧光蛋白的位置 是否跨膜?

发自小木虫IOS客户端
6楼2023-12-22 15:32:20
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