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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 为什么BIFC能观察到蛋白互作LCA观察不到
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恰好

木虫 (小有名气)

[求助] 为什么BIFC能观察到蛋白互作LCA观察不到 已有1人参与

各位大牛，请教个蛋白互作的问题，有两个目的基因我们已经应用BIFC观察到明确互作，但是Luciferase Complementation Assay不管怎么优化条件就是看不到荧光呢？阳性对照能拍出来，也尝试在烟草中共转染了P19，都不行。请问有什么好的建议吗？先谢过！
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1楼 2022-01-10 16:11:34
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是个甜豆豆呀

新虫 (小有名气)
注意标签荧光蛋白的位置 是否跨膜？

发自小木虫IOS客户端
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6楼2023-12-22 15:32:20
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chiangscn

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 感谢回帖 2022-01-28 17:37:04
不同技术之间，结果上有不同、不一致，太正常不过，有很多原因，不细说，查文献就知。不然好期刊怎么会要求要用不同技术验证呢，体内体外的都要有的。否则，无法令人信服。BiFC与LCA属于同类技术，我们只用前者，而不用后者，因为前者可以看到互作的位置，而后者无法提供此类信息。应该考虑用Co-IP验证，至少用pull-down技术验证。
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恰好
wholaughslastlaughsbest
2楼2022-01-27 15:24:25
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恰好

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by chiangscn at 2022-01-27 15:24:25
不同技术之间，结果上有不同、不一致，太正常不过，有很多原因，不细说，查文献就知。不然好期刊怎么会要求要用不同技术验证呢，体内体外的都要有的。否则，无法令人信服。BiFC与LCA属于同类技术，我们只用前者，而 ...

收到，谢谢指导！
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3楼2022-02-22 16:07:21
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oylb2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
还是植物好: 金币+5, 感谢应助 2022-06-05 17:01:08
BIFC具有一定的假阳性可能。就好比地铁上太拥挤的情况下，A与B本来不认识，结果被挤到了一起，产生了A与B手挨在一起的假象。BIFC时，瞬时表达水平不宜太高
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5楼2022-05-26 22:16:44
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查看全部 6 个回答
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