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白芷zmy

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助:做植物miRNA定量 CT值总是在30以上

我最近在做植物miRNA的荧光定量,我用了很多方法跑出来的miRNA 的CT值都在33以上。
茎环法:提转基因拟南芥的总RNA,利用茎环引物反转录,然后跑定量,内参U6的CT值大概在20,但是目的miRNA CT值在33以上;
加尾法:用生工的加尾法试剂,内参的CT和目的miRNA CT值都30以上了。
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白芷zmy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by MOK呀 at 2022-01-08 00:05:24
对了,楼主请问你画过miRNA的二级结构吗?

我没有画过哎
5楼2022-01-08 10:45:56
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匿名

本帖仅楼主可见
2楼2022-01-07 17:14:00
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白芷zmy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by MOK呀 at 2022-01-07 17:14:00
qPCR的话一般程序设置40个循环,ct值大于35的时候数据可能就不太可靠了,不过也要看对应的扩增曲线和溶解峰,如果溶解峰比较尖锐,单一,而且同一MiRNA的重复性好的话,我觉得数据可以用的,实在不放心就用半定量表 ...

谢谢大佬回复。我现在比较怀疑是模板量的问题,我目前提RNA用的是生工的试剂盒,他上面是说可以提miRNA,不过我感觉效果一般,我现在先加大我的模板量试一试,如果不行,就换另一种miRNA试剂盒。
3楼2022-01-07 19:09:46
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匿名

本帖仅楼主可见
4楼2022-01-08 00:05:24
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