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白芷zmy

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助：做植物miRNA定量 CT值总是在30以上

我最近在做植物miRNA的荧光定量，我用了很多方法跑出来的miRNA 的CT值都在33以上。
茎环法：提转基因拟南芥的总RNA，利用茎环引物反转录，然后跑定量，内参U6的CT值大概在20，但是目的miRNA CT值在33以上；
加尾法：用生工的加尾法试剂，内参的CT和目的miRNA CT值都30以上了。

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1楼 2022-01-07 00:31:39

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白芷zmy

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引用回帖:

2楼: Originally posted by MOK呀 at 2022-01-07 17:14:00
qPCR的话一般程序设置40个循环，ct值大于35的时候数据可能就不太可靠了，不过也要看对应的扩增曲线和溶解峰，如果溶解峰比较尖锐，单一，而且同一MiRNA的重复性好的话，我觉得数据可以用的，实在不放心就用半定量表 ...

谢谢大佬回复。我现在比较怀疑是模板量的问题，我目前提RNA用的是生工的试剂盒，他上面是说可以提miRNA，不过我感觉效果一般，我现在先加大我的模板量试一试，如果不行，就换另一种miRNA试剂盒。