应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒载体双酶切无条带是何原因
汕头大学海洋科学接受调剂
221/3返回列表123下一页
查看: 2556  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒载体双酶切无条带是何原因

目前已将目的片段连接到了质粒载体上，用原引物检测得到了目的条带。现在双酶切质粒却没有条带是什么原因呢？反应体系是20μl，质粒DNA1μl，反应5h。电泳后什么也看不到。是上样量的问题吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-24 20:19:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoyadxy

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
质粒DNA1μl的量太少了，你的双酶切的效率是多高啊，这么少的模板量在20μl体系里再去其中的一点电泳可能什么都看不见
赞一下(12人) 回复此楼
4楼2009-08-24 20:46:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:33
有原来的质粒片段吗？是所有的条带都没有，还是只有目的条带没有呢？也有可能是你提的质粒质量不是太好，酶切时候降解啦！你可以先加大质粒的量再酶切一下，如果还是没有的话，我建议你纯化一下质粒，然后再酶切！
赞一下(12人) 回复此楼
一个人可以不成功，但不可以不成长！
10楼2009-08-25 08:26:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

beisimai895

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
你可以将质粒的量再多加一些,会不会是质粒的量太少,电泳检测不出,又或者是又酶切,那你的buffer 用对了吗?
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-08-24 20:24:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能性非常大，越短的片段越看不清楚
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-08-24 20:24:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baiyidao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
酶切BUFFER最重要，酶的储藏条件,
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-08-24 20:49:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ytetyio09

新虫 (正式写手)
1μl is not enough
赞一下 回复此楼
6楼2009-08-24 22:35:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

傻子

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:33
可以试试PAGE电泳，我做过1微升酶切后PAGE跑的条带很清晰。但是双酶切的体系要注意，buffer要合适，能对两种酶适用，不知道你用的那种酶，我用的NEB的，他们有具体的双酶切的说明，你可以看看，或者找你所用酶的说明看看有没有对双酶切体系buffer的建议。
赞一下(11人) 回复此楼
1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
7楼2009-08-24 23:54:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2009/8/24 20:24:
你可以将质粒的量再多加一些,会不会是质粒的量太少,电泳检测不出,又或者是又酶切,那你的buffer 用对了吗?

我用的也是NEB的，我从网站查的，两种酶切用的buffer3。
赞一下 回复此楼
8楼2009-08-25 08:20:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 傻子 at 2009/8/24 23:54:
可以试试PAGE电泳，我做过1微升酶切后PAGE跑的条带很清晰。但是双酶切的体系要注意，buffer要合适，能对两种酶适用，不知道你用的那种酶，我用的NEB的，他们有具体的双酶切的说明，你可以看看，或者找你所用酶的说 ...

我用的也是NEB的，共用buffer也是从其网站查的。我没做过PAGE，怎么做？麻烦吗？都用那些设备？
赞一下 回复此楼
9楼2009-08-25 08:22:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greatsaint 的主题更新
221/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +21 ORCHID1 2026-04-10 23/1150 2026-04-13 15:22 by 张zhihao
[考研] 一志愿2110，化学学硕310分，本科重点双非求调剂 +20 努力奋斗112 2026-04-08 20/1000 2026-04-13 14:24 by 张zhihao
[考研] 材料085601调剂 +30 何润采123 2026-04-10 32/1600 2026-04-13 09:51 by szhize
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-08 9/450 2026-04-12 02:24 by 秋豆菜芽
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 11/550 2026-04-11 19:57 by 逆水乘风
[考研] 农学0904 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-11 3/150 2026-04-11 17:22 by daydayup2005
[考研] 生物学308求调剂（一志愿华东师大） +6 相信必会光芒万� 2026-04-10 6/300 2026-04-11 05:23 by zhuwenxu
[考研] 调剂 +12 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 13/650 2026-04-10 22:36 by Ftglcn90
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 求调剂 +11 翩翩一书生 2026-04-09 13/650 2026-04-10 10:27 by liuhuiying09
[考研] 347材料专硕求调剂 +19 zj8215216 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:36 by 690616278
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 278求调剂 +27 范婷娜 2026-04-07 31/1550 2026-04-09 20:49 by zhouxiaoyu
[考研] 机械专硕273请求调剂 +6 庚申壬申 2026-04-07 6/300 2026-04-08 22:41 by bljnqdcc
[考研] 11408 325分 +3 jgtxuxgkx 2026-04-07 3/150 2026-04-07 23:10 by lbsjt
[考研] 软工学硕299求调剂 +6 useryy 2026-04-07 6/300 2026-04-07 09:50 by vgtyfty
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭