应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒载体双酶切无条带是何原因
222/3返回列表上一页123下一页
查看: 2507  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

paulajjh

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我不知道你之前的质粒浓度？如果很浓，现在没有条带，那有可能是酶切的问题。但如果之前就不浓，那你加大上样量看看
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2009-08-25 08:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-7 16:53
一般酶切都是10U对应1微克
然后注意甲基化
还有跑电泳的时候是否有超螺旋结构，有就说明没切动
赞一下(11人) 回复此楼
12楼2009-08-25 08:38:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们20ul体系一般用10ul质粒
赞一下(1人) 回复此楼
13楼2009-08-25 09:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhyzx

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:34
如果只是检测一下是否有目的条带的话，10ul体系就够了，我们的做法是8ul质粒，1ulBuffer,1ul酶。这样效果很好。
你的问题可以看看琼脂糖胶是不是比较厚同时片段又比较小，这样的话很难看出来。
祝顺利！
赞一下(11人) 回复此楼
14楼2009-08-25 11:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kitty8682

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
反应体系可以适当加大一些，而且酶切五小时会不会是时间过长，我平时就用两三小时
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2009-08-25 13:22:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tangtl

木虫 (正式写手)

小木虫潜水者
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-8 15:06
关键是你双酶切的目的片段大小，如果100bp内的。一般都看不到，我曾经用了高浓度的胶想跑小条带出来。结果是没有看到！一般你把没有酶切的对照一起跑电泳、可以看到明显的滞后性，然后通过转化来验证双酶切是否成功。
赞一下(11人) 回复此楼
16楼2009-08-25 15:17:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatsaint

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by tangtl at 2009/8/25 15:17:
关键是你双酶切的目的片段大小，如果100bp内的。一般都看不到，我曾经用了高浓度的胶想跑小条带出来。结果是没有看到！一般你把没有酶切的对照一起跑电泳、可以看到明显的滞后性，然后通过转化来验证双酶切是否成 ...

我的目的片段在750bp左右，我想应该能看到的。
赞一下 回复此楼
17楼2009-08-25 17:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beike2208

木虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
查一下这两个酶在该buffer中的效率，如果效率太低就换一下。要是酶失活的话也可能。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2009-08-25 19:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
原因很多~好好反思一下自己的实验步骤~然后找准错误或者很有可能错误的地方，重新来一遍~
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
19楼2009-08-25 19:45:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caicaiyy

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
质粒能跑出来吗？如果质粒能跑出来那就是酶切的问题，如果不能跑出来那就是电泳的问题、
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2009-10-07 16:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 greatsaint 的主题更新
222/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学学硕求调剂 +4 小羊睡着了? 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:42 by hyzs6688
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +3 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:47 by pswait
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 求调剂材料学硕080500，总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 070300化学319求调剂 +7 锦鲤0909 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:46 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料305分求调剂 +6 想上岸的鲤鱼 2026-03-18 7/350 2026-03-21 01:03 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭