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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒载体双酶切无条带是何原因

目前已将目的片段连接到了质粒载体上,用原引物检测得到了目的条带。现在双酶切质粒却没有条带是什么原因呢?反应体系是20μl,质粒DNA1μl,反应5h。电泳后什么也看不到。是上样量的问题吗?
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heismeng

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+3,VIP+0): 10-7 16:53
一般酶切都是10U对应1微克
然后注意甲基化
还有跑电泳的时候是否有超螺旋结构,有就说明没切动
12楼2009-08-25 08:38:36
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beisimai895

木虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
你可以将质粒的量再多加一些,会不会是质粒的量太少,电泳检测不出,又或者是又酶切,那你的buffer 用对了吗?
2楼2009-08-24 20:24:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


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可能性非常大,越短的片段越看不清楚
3楼2009-08-24 20:24:37
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)

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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
质粒DNA1μl的量太少了,你的双酶切的效率是多高啊,这么少的模板量在20μl体系里再去其中的一点电泳可能什么都看不见
4楼2009-08-24 20:46:30
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