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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒载体双酶切无条带是何原因
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greatsaint

银虫 (小有名气)

[交流] 质粒载体双酶切无条带是何原因

目前已将目的片段连接到了质粒载体上，用原引物检测得到了目的条带。现在双酶切质粒却没有条带是什么原因呢？反应体系是20μl，质粒DNA1μl，反应5h。电泳后什么也看不到。是上样量的问题吗？
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1楼 2009-08-24 20:19:58
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beike2208

木虫 (初入文坛)
★
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查一下这两个酶在该buffer中的效率，如果效率太低就换一下。要是酶失活的话也可能。
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18楼2009-08-25 19:40:33
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
你可以将质粒的量再多加一些,会不会是质粒的量太少,电泳检测不出,又或者是又酶切,那你的buffer 用对了吗?
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2楼2009-08-24 20:24:29
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能性非常大，越短的片段越看不清楚
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3楼2009-08-24 20:24:37
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:53
质粒DNA1μl的量太少了，你的双酶切的效率是多高啊，这么少的模板量在20μl体系里再去其中的一点电泳可能什么都看不见
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4楼2009-08-24 20:46:30
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