24小时热门版块排行榜    

查看: 1098  |  回复: 2
【悬赏金币】回答本帖问题,作者拇指大姑娘将赠送您 5 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

拇指大姑娘

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母信号肽分泌实验 已有1人参与

请求实验大佬指导,我最近在做蛋白的信号肽分泌活性的试验。我研究的蛋白经signalP预测有信号肽,大概17个aa序列,然后我连接到PSUC2的载体上转化到酵母感受态YTK12当中,但是转化后将SD-trp培养基上生长的菌落挑到YPRAA培养基上面的时候划线没有菌落长出来,就连阳性对照avr1b都没长,相反酵母菌株YTK12长出来了,我分析了一下会不会是培养基的问题,首先棉子糖的种类是不是有区别,还有就是加的抗霉素A的浓度,但是我们重新做了一批培养基,还是没有长出来,实在是不知道哪里出了问题,还请大佬指导一下。还有就是我选择信号肽长度的时候,并没有按照信号肽预测软件的17个aa所对应的长度,我选了90bp的长度。会不会是这个的问题呢?

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

烟王之王

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酵母这个实验很不靠谱的,建议换成基于可以引起坏死的质外体效应蛋白的方法。或者是直接上最高级的,在烟草里带着信号肽过表达,然后有方法可以把各组分蛋白分开,再WB检测你的目的蛋白是否被分泌出来了。如果一定要用酵母这个方法,就重新换下YTK12菌株再重新做个转化,你阳性都没长我觉得可能是操作问题。
3楼2021-12-17 09:26:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 3 个回答

小瓢虫ing

银虫 (著名写手)

大佬,方便赠送一点psuc2载体和酵母吗?
2楼2021-11-23 18:28:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-06 3/150 2026-03-06 11:15 by lature00
[考研] 085701环境工程295求调剂,一志愿A区211 +3 等春来, 2026-03-06 3/150 2026-03-06 10:56 by 杨杨杨紫
[考研] 324求调剂 +5 wxz2 2026-03-03 7/350 2026-03-06 00:15 by wutongshun
[考研] 328求调剂 +6 vuzhdkfjkx 2026-03-04 7/350 2026-03-05 23:28 by Leeding1356
[考研] 083000,总分284,求调剂 +3 徐yr 2026-03-04 3/150 2026-03-05 22:33 by Y比B卜
[考研] 一志愿武理085601专硕347分求调剂 +4 啊欧欧欧 2026-03-04 5/250 2026-03-05 19:27 by Leding1356
[考研] 085701环境工程 求调剂 +7 xiiiia 2026-03-04 7/350 2026-03-05 09:49 by 热情沙漠
[考研] 0703化学 学硕 理工科均可 不区分研究方向 总分279求调剂 +7 1一11 2026-03-03 7/350 2026-03-05 09:23 by xwxstudy
[考研] 292求调剂 +9 yhk_819 2026-02-28 9/450 2026-03-04 16:06 by sslc1985
[考研] 347分电子信息专硕求调剂 +3 咕嘟咕嘟1 2026-03-03 3/150 2026-03-04 12:32 by 热情沙漠
[考研] 0703化学调剂 +4 G212 2026-03-03 5/250 2026-03-04 09:34 by 每天只摆一小会
[考研] 306求调剂 +7 张张张张oo 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:35 by L135790
[考研] 化工专硕调剂 +4 利好利好. 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:30 by L135790
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业,申博 +4 更多的是 2026-02-27 5/250 2026-03-03 17:44 by wenium
[考研] 292求调剂 +3 sgbl 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:30 by barlinike
[考研] 268求调剂 +6 好运连绵不绝 2026-03-02 6/300 2026-03-03 13:03 by 秋收
[考研] 0856求调剂285 +11 吕仔龙 2026-02-28 11/550 2026-03-02 20:15 by hypershenger
[考研] 材料调剂 +6 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:42 by Jy?
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
信息提示
请填处理意见