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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 酵母信号肽分泌实验
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拇指大姑娘

新虫 (初入文坛)

[求助] 酵母信号肽分泌实验 已有1人参与

请求实验大佬指导，我最近在做蛋白的信号肽分泌活性的试验。我研究的蛋白经signalP预测有信号肽，大概17个aa序列，然后我连接到PSUC2的载体上转化到酵母感受态YTK12当中，但是转化后将SD-trp培养基上生长的菌落挑到YPRAA培养基上面的时候划线没有菌落长出来，就连阳性对照avr1b都没长，相反酵母菌株YTK12长出来了，我分析了一下会不会是培养基的问题，首先棉子糖的种类是不是有区别，还有就是加的抗霉素A的浓度，但是我们重新做了一批培养基，还是没有长出来，实在是不知道哪里出了问题，还请大佬指导一下。还有就是我选择信号肽长度的时候，并没有按照信号肽预测软件的17个aa所对应的长度，我选了90bp的长度。会不会是这个的问题呢？

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2021-11-13 12:02:04
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小瓢虫ing

银虫 (著名写手)
大佬，方便赠送一点psuc2载体和酵母吗？
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2楼2021-11-23 18:28:08
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烟王之王

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酵母这个实验很不靠谱的，建议换成基于可以引起坏死的质外体效应蛋白的方法。或者是直接上最高级的，在烟草里带着信号肽过表达，然后有方法可以把各组分蛋白分开，再WB检测你的目的蛋白是否被分泌出来了。如果一定要用酵母这个方法，就重新换下YTK12菌株再重新做个转化，你阳性都没长我觉得可能是操作问题。
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3楼2021-12-17 09:26:54
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