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内容

高通量测序分析环境微生物(微生物菌群分析、微生物多样性分析、微生物群落分析)

北京宝杰罗生物科技有限公司
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技术服务e-mail:biogenro55@126.com
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研究对象:
样品来源:土壤、海洋、活性污泥、动物肠道、口腔、胃、粪便、酒曲、窖泥、发酵液、菌剂、食品等;

样品形式:环境样品、基因组dna、pcr产物;

菌群多样性组成谱测序研究

菌群多样性组成谱测序以细菌/古菌16s rrna基因可变区、真菌18s rrna基因可变区或真菌its(internal transcribed spacer)内转录间隔区等微生物特征序列(signature sequence)为靶点,通过检测序列的变异和数量,反映菌群中各类微生物物种的身份和丰度,从而快速解码菌群物种分布特征,阐明样本间多样性和组成差异,进而发现差异相关物种。
产品特点

1. 直接对菌群样本中的微生物特征序列进行扩增检测,简单快速且性价比高,并克服了绝大部分微生物无法纯培养的难题;

2. 自动化、专业的dna提取流程,配合高保真dna聚合酶进行pcr扩增,并严格把控扩增循环数,确保菌群组成客观真实;

3. 使用illumina miseq的小型化测序平台,周期更短,读长更长(2′300 bp),每个样本都能一次性获得数万条序列,即使低丰度物种也能精确定量;

4. 多种物种注释数据库可选,根据样本来源按需选择greengenes/silva/homd/rdp/unite/maarjam等数据库,最优化物种的分类鉴定;

5. 可对菌群进行代谢功能预测,通过组成数据,解读潜在功能,并能指导后续宏基因组测序研究。

实验流程

微生物组总dna提取→目标片段pcr扩增→扩增产物检测定量→测序文库制备→上机进行高通量测序

分析流程




典型分析结果展示



菌群物种分类组成的krona交互展示图



unifrac pcoa分析的样本三维排序图



lefse组间差异物种的显著性排序图



lefse组间差异物种的分类等级树图



rda约束排序图



物种互作关联网络图



基于16s rrna基因的picrust功能预测小提琴图


值得一试的深度分析内容

分析项目

分析要求

cap主坐标典型相关分析

分组≥ 2

菌群分型(enterotype)分析

样本≥ 20

roc曲线建模验证分析

分组≥ 2

otu—样本二分网络分析

样本≥ 3

物种——功能一致性circos分析

样本≥ 3






分析内容
分析项目

分析

备注


基础分析项目


原始测序数据的质控


         
1

原始测序数据的处理



         
2

疑问序列的剔除



         
3

高质量序列长度分布统计



         
序列归并和otu划分


1

otu划分



         
2

otu分类地位鉴定



         
3

otu精简和分类鉴定结果统计



         
4

多样本共有otu的venn图分析



样本(组)≤ 5




常规分析项目


alpha多样性分析


1

rarefaction稀疏曲线



         
2

specaccum物种累积曲线



样本≥ 10


3

丰度等级曲线



         
4

alpha多样性指数计算



         
分类组成分析


1

各分类水平的微生物类群数统计



         
2

各分类水平的分类学组成分析



         
3

metastats分析



样本(组)≥ 2


4

lefse分析



分组≥ 2


群落组成交互式可视化


1

系统发育树构建



         
2

megan可视化展示



         
3

graphlan可视化展示



         
4

krona交互式展示



         
5

热图分析



样本≥ 3


beta多样性分析


1

pca分析



样本≥ 3


2

unifrac-pcoa分析



样本≥ 3


3

unifrac-mds分析



样本≥ 5


4

unifrac-upgma聚类分析



样本≥ 3


5

基于unifrac距离的多组比较和箱线图展示



分组≥ 2


       
高级分析项目

       
菌群比较分析和关键物种筛选

       
1

rda分析



样本≥ 3:提供影响因素数值或分组≥ 2

       
2

pls-da分析



分组≥ 2

       
3

adonis/permanova分析



样本≥ 3:提供影响因素数值或分组≥ 2

       
4

anosim分析



分组≥ 2

       
5

随机森林分析



分组≥ 2

       
优势物种互作关联网络分析



样本(组)≥ 3

       
群落代谢功能预测



仅限16s rrna基因数据

送样要求 1

1. 样品类型: dna
2. 样品需求量:≥500ng
3. 样品浓度: ≥10ng/μl
4. 样品纯度:od260/280=1.8-2.0并确保dna无降解
5. 样品保存期间切忌反复冻融,送样时请使用冰袋或干冰运输。


送样要求 2

1. 样品类型: pcr产物
2. 样品需求量:≥100ng
3. 样品浓度: ≥5ng/μl
4. 样品纯度:od260/280=1.8-2.0并确保pcr产物无降解
5. 样品保存期间切忌反复冻融,送样时请使用冰袋或干冰运输。

[ Last edited by 宝杰罗生物 on 2021-10-29 at 09:06 ]

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2楼2021-10-25 16:43:23
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宝杰罗生物(金币+3): 谢谢参与
3楼2021-10-25 16:43:27
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宝杰罗生物(金币+3): 谢谢参与
·
4楼2021-10-25 16:53:06
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宝杰罗生物(金币+3): 谢谢参与
5楼2021-10-25 20:38:10
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宝杰罗生物(金币+3): 谢谢参与
6楼2021-10-26 20:24:28
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7楼2021-10-28 22:34:37
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8楼2021-12-01 17:40:19
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chenhuanlong

禁虫 (文学泰斗)


宝杰罗生物(金币+5): 谢谢参与
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9楼2022-01-10 09:59:21
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mecart2021

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10楼2022-01-19 10:23:27
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