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spiderboy

金虫 (正式写手)

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[交流] 用cDNA做模板PCR扩不出来……

我用cDNA做模板扩1.4K和2.6K的片段，扩了很多次都扩不出来。。
退火温度用过55度和50度。。。
请问是哪出了问题。。

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1楼 2009-08-22 20:40:11

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tancf

金虫 (小有名气)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-26 19:06

PCR没有结果，很多因素是要考虑的。
你觉得你的模板怎么样呢i？如果不敢肯定的话，不妨先去测序看看。
引物也是比较关键的，重新用软件核对一下，看看有没有大问题。
对于PCR体系，要注意各个组分的量的范围，这个你可以查查PCR的技术方面的说明，它会告诉你各个组分的量的范围。

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7楼2009-08-23 14:07:00

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-22 20:54

自我感觉cDNA质量怎么样？

可以试试多重PCR，有可能你第一次P出来的量太少，跑电泳基本上看不到条带。

将PCR结果做个稀释比如1X 10X ，取1ul为模板再PCR。

或者你可以试试touchdown PCR ，我PCR不出东西的时候，最先都是用这两种方法重

新PCR，往往能够奏效。

祝好运。

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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.