应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用cDNA做模板PCR扩不出来……
51/1返回列表
查看: 1062  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 用cDNA做模板PCR扩不出来……

我用cDNA做模板扩1.4K和2.6K的片段，扩了很多次都扩不出来。。
退火温度用过55度和50度。。。
请问是哪出了问题。。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-08-22 20:40:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fishing2939

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要稀释的
建议验证一下模板
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-08-22 22:16:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-22 20:54
自我感觉cDNA质量怎么样？

可以试试多重PCR，有可能你第一次P出来的量太少，跑电泳基本上看不到条带。

将PCR结果做个稀释比如1X 10X ，取1ul为模板再PCR。

或者你可以试试touchdown PCR ，我PCR不出东西的时候，最先都是用这两种方法重

新PCR，往往能够奏效。

祝好运。
赞一下(11人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-22 20:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
谢谢！对于楼上你说的第一个方法，因模板少，第二次扩的时候还要再稀释吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-08-22 21:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-23 13:16
引用回帖:
Originally posted by spiderboy at 2009-8-22 21:50:
谢谢！对于楼上你说的第一个方法，因模板少，第二次扩的时候还要再稀释吗？

同时作几个梯度的PCR

只需要第一次PCR产物 2ul 就够了。

第一个PCR为1ul为模板，第二个为剩下的1ul稀释10倍 100倍 后各取1ul为模板。

祝好运。
赞一下(11人) 回复此楼
5楼2009-08-23 00:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +3 拒绝冷暴力 2026-03-25 3/150 2026-03-25 16:03 by JourneyLucky
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:38 by cocolv
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-24 4/200 2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境，总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-23 8/400 2026-03-23 20:36 by Creta
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭