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spiderboy

金虫 (正式写手)

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[交流] 用cDNA做模板PCR扩不出来……

我用cDNA做模板扩1.4K和2.6K的片段，扩了很多次都扩不出来。。
退火温度用过55度和50度。。。
请问是哪出了问题。。

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1楼2009-08-22 20:40:11

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fishing2939

新虫 (初入文坛)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

要稀释的
建议验证一下模板

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4楼2009-08-22 22:16:20

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

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amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-22 20:54

自我感觉cDNA质量怎么样？

可以试试多重PCR，有可能你第一次P出来的量太少，跑电泳基本上看不到条带。

将PCR结果做个稀释比如1X 10X ，取1ul为模板再PCR。

或者你可以试试touchdown PCR ，我PCR不出东西的时候，最先都是用这两种方法重

新PCR，往往能够奏效。

祝好运。

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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.