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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 用cDNA做模板PCR扩不出来……
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spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 用cDNA做模板PCR扩不出来……

我用cDNA做模板扩1.4K和2.6K的片段，扩了很多次都扩不出来。。
退火温度用过55度和50度。。。
请问是哪出了问题。。
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1楼 2009-08-22 20:40:11
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微笑漩涡

新虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+0,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-23 13:16
引用回帖:
Originally posted by spiderboy at 2009-8-22 21:50:
谢谢！对于楼上你说的第一个方法，因模板少，第二次扩的时候还要再稀释吗？

同时作几个梯度的PCR

只需要第一次PCR产物 2ul 就够了。

第一个PCR为1ul为模板，第二个为剩下的1ul稀释10倍 100倍 后各取1ul为模板。

祝好运。
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5楼2009-08-23 00:39:43
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流！ 8-22 20:54
自我感觉cDNA质量怎么样？

可以试试多重PCR，有可能你第一次P出来的量太少，跑电泳基本上看不到条带。

将PCR结果做个稀释比如1X 10X ，取1ul为模板再PCR。

或者你可以试试touchdown PCR ，我PCR不出东西的时候，最先都是用这两种方法重

新PCR，往往能够奏效。

祝好运。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-08-22 20:48:04
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spiderboy

金虫 (正式写手)
谢谢！对于楼上你说的第一个方法，因模板少，第二次扩的时候还要再稀释吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-08-22 21:50:16
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fishing2939

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要稀释的
建议验证一下模板
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-08-22 22:16:20
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