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lanlan1119金虫 (小有名气)
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关于考马斯亮兰法测定蛋白质
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我用考马斯亮兰法测蛋白含量时，做标准曲线用的G-球蛋白溶液（1mg/ml）是用纯化水溶解的，得到的标准曲线相关性是0.99947。 但做样品时，样品在纯化水中很难溶解，我用0.5%的碳酸氢钠溶解配制成1mg/ml（空白加入0.1ml的0.5%的碳酸氢钠和5ml的考马斯亮兰，且0.5%的碳酸氢钠在595nm下测紫外吸收为0.001），取0.04ml的样品溶液再用纯化水补充至0.1ml后测定，一共测定了六批样品，得到的蛋白含量都在0.5%左右，而用hplc测得的六批样品纯度都在95%以上，蛋白含量测定值明显偏高。 问题是不是出在标准曲线上啊，因为标准曲线是用纯化水溶解的，而样品测定时是用0.5%的碳酸氢钠溶解的。 请有经验的高手指点 |
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我用0.5%的碳酸氢钠配制的标准溶液，测出来的标准曲线的相关性也可以0.9997.但是根据标准曲线计算出的样品中的蛋白含量还是挺高。 不大明白楼上所说的“是否确保样品的吸光值在你的标准曲线范围内呢”是什么意思。我做的样品吸收值都在0.018~0.047之间，标准曲线的吸收都在0.059~0.562之间，如楼上所说，我应该曾加样品测定时样品溶液的加入量，或者重新绘制更低浓度范围内的标准曲线，使样品的吸收值在标准曲线的吸收范围内吗？ 可不可以采用这样一种方法：在配制样品溶液时，每个样品管中加入40微升的样品溶液和20微升的g-球蛋白，最后再加入0.5%的碳酸氢钠40微升至，这样整个样品测定时的吸光值就上去了，也会在标准曲线的吸收范围内，计算的时候再扣除加入的g-球蛋白的量。 [ Last edited by lanlan1119 on 2009-8-21 at 09:44 ] |
5楼2009-08-21 09:24:35
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