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lanlan1119

金虫 (小有名气)

[交流] 关于考马斯亮兰法测定蛋白质

我用考马斯亮兰法测蛋白含量时,做标准曲线用的G-球蛋白溶液(1mg/ml)是用纯化水溶解的,得到的标准曲线相关性是0.99947。
但做样品时,样品在纯化水中很难溶解,我用0.5%的碳酸氢钠溶解配制成1mg/ml(空白加入0.1ml的0.5%的碳酸氢钠和5ml的考马斯亮兰,且0.5%的碳酸氢钠在595nm下测紫外吸收为0.001),取0.04ml的样品溶液再用纯化水补充至0.1ml后测定,一共测定了六批样品,得到的蛋白含量都在0.5%左右,而用hplc测得的六批样品纯度都在95%以上,蛋白含量测定值明显偏高。
问题是不是出在标准曲线上啊,因为标准曲线是用纯化水溶解的,而样品测定时是用0.5%的碳酸氢钠溶解的。
请有经验的高手指点
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zhuangyong

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做测定标准曲线时,应该检验是否都是在没有蛋白质的参比溶液下所测得到的吸光度值
10楼2009-08-21 19:54:21
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austin2008

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 8-20 22:14
是啊,标准曲线测定条件要与实验测定条件一致,紫外吸收为0.001这个值太小很不准确,蛋白浓度太低了!吸光度值在0.2-0.8之间是比较准确的
优秀是一种习惯;生命是一种过程;放弃是一种智慧;缺点是一种恩惠!
2楼2009-08-20 19:19:07
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wangyh2028

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用的是测核酸的小比色杯吧?我们一般不用那个,都用那个大的。 标准曲线要和测定的实际溶液一致才比较准确。
3楼2009-08-20 22:14:17
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飘在海上的雪

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先如2楼所说,检测样品条件与标准曲线一定一致;再有是否确保样品的吸光值在你的标准曲线范围内呢,这非常重要。
不在沉默中爆发,就在沉默着死亡!
4楼2009-08-21 08:37:43
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