24小时热门版块排行榜    

查看: 2548  |  回复: 4

沙墨石

新虫 (初入文坛)

[交流] 镍柱亲和层析,纯化结果总是有三四十kDa的杂蛋白 已有4人参与

请教一下,用大肠杆菌表达目的蛋白,超声破碎后,使用镍柱亲和层析时,填料是Ni-IMAC,结合缓冲液是20mmol/L的Tris-HCl,500mmol/L  NaCl,pH7.5。
SDS-PAGE蛋白胶图上,总是有三四十kDa的杂蛋白,应该怎样提高纯化效果呢?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
吧这个蛋白打个质谱,分析下是什么蛋白。

发自小木虫Android客户端
2楼2021-09-04 21:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SA13008082

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
等度洗脱还是线性洗脱?

发自小木虫Android客户端
3楼2021-09-05 22:22:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果不表达质粒,平行做实验,能看到这条带吗?
1:如果是目的蛋白分子量大于该条带,则可能是目的条带降解产物,
2:如果是该蛋白比目的蛋白大,可能是目的蛋白聚合物
3:可能是大肠杆菌自身的蛋白(有些文献会报道)

1,2比较难除去,分子量差别大考虑分子筛
3的话,过离子交换柱或其他柱子可能有效
行至水穷处,坐看云起时
4楼2021-09-06 18:11:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小汰宝

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能性之一是质粒带的抗性蛋白。表达量高,如果刚好有几个his,也容易挂在镍柱上。梯度洗脱可以提高纯度

发自小木虫IOS客户端
5楼2021-11-25 12:10:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 沙墨石 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320材料一志愿西工大专硕英二数二 有两年光伏工作经验 +3 锤某人 2026-03-04 3/150 2026-03-04 18:39 by houyaoxu
[考研] 求调剂 +7 博斯特525 2026-03-04 7/350 2026-03-04 18:09 by houyaoxu
[考研] 085701环境工程 求调剂 +6 xiiiia 2026-03-04 6/300 2026-03-04 16:45 by yuningshan
[考研] 085601 材料工程 320 +6 和乐瑶 2026-03-03 6/300 2026-03-04 16:01 by chixmc
[考研] 一志愿314求调剂 +7 202111120625 2026-03-03 7/350 2026-03-04 15:56 by zhukairuo
[考研] 331求调剂 +3 zzZ&zZ 2026-03-03 3/150 2026-03-04 10:37 by aaa显卡批发王总
[考研] 一志愿西工大材料学,英一数二总分321分,求调剂。 +3 zz05zz 2026-03-02 5/250 2026-03-04 09:16 by lbsjt
[考研] 0703化学学硕 288分 +4 旅行中的紫葡萄 2026-03-03 4/200 2026-03-03 23:41 by ch1979
[考研] 接收调剂 +15 津萌津萌 2026-03-02 23/1150 2026-03-03 23:39 by 梦—-
[考研] 化工专硕调剂 +4 利好利好. 2026-03-03 7/350 2026-03-03 21:30 by L135790
[考研] 298求调剂一志愿中海洋 +3 lour. 2026-03-03 3/150 2026-03-03 20:41 by gxg2025
[考研] 292求调剂 +3 sgbl 2026-03-03 3/150 2026-03-03 17:30 by barlinike
[考研] 一志愿天津大学085600 319分 材料与化工 金属方向 求调剂 +4 青科11 2026-03-02 4/200 2026-03-03 14:43 by xiaomc_gzh
[考研] 299求调剂 +5 kkcoco25 2026-03-02 9/450 2026-03-03 12:55 by 公瑾逍遥
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+8 ,!? 2026-03-02 10/500 2026-03-03 12:01 by EBSD
[考研] 306分材料调剂 +5 chuanzhu川烛 2026-03-01 6/300 2026-03-02 19:51 by 张晓芳0105
[考研] 材料调剂 +3 恒顺自然 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:49 by L135790
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
信息提示
请填处理意见