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新虫 (初入文坛)

[交流] 镍柱亲和层析，纯化结果总是有三四十kDa的杂蛋白已有4人参与

请教一下，用大肠杆菌表达目的蛋白，超声破碎后，使用镍柱亲和层析时，填料是Ni-IMAC，结合缓冲液是20mmol/L的Tris-HCl，500mmol/L NaCl，pH7.5。
SDS-PAGE蛋白胶图上，总是有三四十kDa的杂蛋白，应该怎样提高纯化效果呢？

1楼 2021-09-04 16:03:24

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专家顾问 (正式写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

如果不表达质粒，平行做实验，能看到这条带吗？
1：如果是目的蛋白分子量大于该条带，则可能是目的条带降解产物，
2：如果是该蛋白比目的蛋白大，可能是目的蛋白聚合物
3：可能是大肠杆菌自身的蛋白（有些文献会报道）

1,2比较难除去，分子量差别大考虑分子筛
3的话，过离子交换柱或其他柱子可能有效

行至水穷处，坐看云起时

4楼2021-09-06 18:11:45

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