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潘小阳阳阳

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 13
帖子: 9
在线: 42分钟
虫号: 26381215
注册: 2021-05-11
专业: 生物化学

[求助] 同源重组遇到的问题求助！已有2人参与

同源重组后，菌落长得不多，但是阳检全部正确，一排条带都对。但是送测之后要不显示未长菌要不就显示没连上，好几次了都这样，孩子心态真的崩了。各位哥哥姐姐求助sos！

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1楼 2021-08-25 11:21:51

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myxmyhh

银虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 394
帖子: 27
在线: 5.8小时
虫号: 3285358
注册: 2014-06-20
性别: GG
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

同源重组效率会很高，一般成功重组上都是满板菌，这里考虑你PCR鉴定的引物不合适导致出现假阳性结果，而实际上并没有重组上。

跟楼上建议一样，采用Insert F 加上 Vector R 来进行菌落PCR。

另外，同源重组失败可以考虑同源臂GC含量的问题，建议检查一下自己的引物，如果引物没有问题则需要更换扩增Insert的模板。

最后，你同源重组失败但是长菌说明Vector并没有酶切干净，可以考虑加长酶切时间。