应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 同源重组遇到的问题求助！
31/1返回列表
查看: 2020  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者潘小阳阳阳将赠送您 5 个金币

潘小阳阳阳

新虫 (初入文坛)

[求助] 同源重组遇到的问题求助！ 已有2人参与

同源重组后，菌落长得不多，但是阳检全部正确，一排条带都对。但是送测之后要不显示未长菌要不就显示没连上，好几次了都这样，孩子心态真的崩了。各位哥哥姐姐求助sos！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-08-25 11:21:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
假阳可能原因是涂了太多的东西在平板上，刮菌反应的时候把insert刮到了，然后PCR就出现了阳性结果

可以设计一个引物在质粒上，一个引物在insert上，这样能扩出条带，就应该是阳性的了

用传统的酶切连接方法试试？ 或者做一下对照试验，看是不是试剂不work?
赞一下(1人) 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2021-08-25 12:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myxmyhh

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同源重组效率会很高，一般成功重组上都是满板菌，这里考虑你PCR鉴定的引物不合适导致出现假阳性结果，而实际上并没有重组上。

跟楼上建议一样，采用Insert F 加上 Vector R 来进行菌落PCR。

另外，同源重组失败可以考虑同源臂GC含量的问题，建议检查一下自己的引物，如果引物没有问题则需要更换扩增Insert的模板。

最后，你同源重组失败但是长菌说明Vector并没有酶切干净，可以考虑加长酶切时间。
赞一下 回复此楼
3楼2021-08-26 17:30:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 潘小阳阳阳 的主题更新
31/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 20/1000 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:33 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 8/400 2026-11-06 05:22 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 4/200 2026-11-06 02:37 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:26 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭