| 查看: 3996 | 回复: 4 | |||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者繁梦倾城将赠送您 10 个金币 | |||
[求助]
琼脂糖凝胶电泳拖尾，急求解决方案！ 已有1人参与
|
|||
|
从肉葡萄球菌中提取质粒，跑电泳未出现质粒条带却严重亮带拖尾，请教大神这是为什么？ 具体方法如下: 1.将肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)ATCC 51365培养12～16h，移取2mL菌液于EP管中，12000rpm离心2min，弃去上清液，用滤纸吸取残留的液体。加入100μL 50mg/mL的溶菌酶、20μL 1mg/mL溶葡萄球菌素于37℃、180rpm作用90min，然后按照传统提取质粒的方法提取肉葡萄球菌的质粒。 2.向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl Buffer P1(请先检查Buffer P1是否已经加入RNase A)，用移液器或涡旋振荡混匀。 3.向步骤2中加入250 μl Buffer P2，温和的上下颠倒混匀8 - 10 次，使菌体充分裂解。 ?4.向步骤3中加入350 μl Buffer P3，立即温和地上下颠倒8 - 10次让溶液彻底中和Buffer P2。 5.将FastPure DNA Mini Columns吸附柱置于Collection Tube 2 ml收集管中。将步骤4上清用移液器小心转移至吸附柱中，注意不要吸到沉淀，12,000 rpm(13,400 × g)离心30 - 60 sec。倒掉收集管中的废液，把吸附柱重新放回收集管中。 6.(可选)加入500 μl Buffer PW1 至吸附柱中。12,000 rpm(13,400 × g)离心30 - 60 sec。弃废液，把吸附柱重新放回收集管中。 ▲注意：如果宿主菌是end A+(TG1，BL21， HB101，JM系列， ET12567等)，这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。 如果宿主菌是endA-宿主菌(DH5α，TOP10等)，此步可省略。 7.加入600 μl Buffer PW2(请检查是否已用无水乙醇稀释)至吸附柱中。12,000 rpm(13,400 × g)离心30 - 60 sec。弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。 8.重复步骤7。 9.将吸附柱放回收集管中。12,000 rpm(13,400 × g)离心1 min干燥吸附柱，目的是将吸附柱中残留的漂洗液彻底去除。 10. 把吸附柱置于一个新的灭菌的1.5 ml 离心管中。加入30 - 100 μl Elution Buffer 至柱吸附柱的膜中央。室温静置2 min，12,000 rpm(13,400 × g）离心1 min洗脱DNA。 11. 弃去吸附柱，DNA产物保存于-20℃，以防止DNA降解。 Ps:但是第6步没有做，不知道有没有关系  发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有121人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
2楼2021-06-23 09:01:13
3楼2021-06-23 16:14:31
|
本帖内容被屏蔽 |
4楼2021-12-23 13:46:09
5楼2022-01-11 12:57:51
投票: