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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 原核表达及诱导
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ahui728

木虫 (文坛精英)

叫兽
看不懂
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我有100双袜子，可以送你一双。
11楼2009-08-13 14:21:28
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magicsite

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
feitiannongying(金币+10,VIP+0):谢谢！！ 8-13 18:21
feitiannongying(金币+5,VIP+0): 10-11 07:07
你需要考虑1.是否基因本身具有信号肽，如果有的话需要去掉，原核不能识别它；2.设置诱导梯度20度24小时25度12小时28度8小时30度4小时，再试试看吧！
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12楼2009-08-13 14:25:07
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
...我差点以为自己进错了区
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13楼2009-08-13 14:28:08
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boyue8260

木虫 (正式写手)

由化工转入陶瓷行业
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有机高分子专业先转行化工，现在从事陶瓷行业
14楼2009-08-13 14:30:09
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panacea007

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by feitiannongying at 2009-8-13 14:18:
就我查到的国内做原核诱导表达的文章IPTG浓度大部分用的是0.5mM的，也有用1mM的，用1uM浓度IPTG的文章我还没发现过。这个建议我会考虑的，谢谢！只要有希望我是不会放弃的。

单位我写错了，是mM，你说得对。

对的，1mM都是过量的，0.1-0.5mM一般就OK。

[ Last edited by panacea007 on 2009-8-13 at 14:35 ]
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15楼2009-08-13 14:32:36
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feitiannongying

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by magicsite at 2009-8-13 14:25:
你需要考虑1.是否基因本身具有信号肽，如果有的话需要去掉，原核不能识别它；2.设置诱导梯度20度24小时25度12小时28度8小时30度4小时，再试试看吧！

请问这个梯度设置有没有什么理论依据？关于信号肽的问题之前我也考虑过，这个基因在NCBI或是TAIR网站的介绍中都没有提到有编码信号肽的序列，考虑到它编码的是膜蛋白么我认为可能会有信号肽，但是用很多信号肽预测软件分析后得到的结果也不一样，有的预测有，有的预测没有，所以我也拿不准是不是有信号肽。如果我按你这个梯度做的话IPTG浓度和培养体系要用多大的，中间我还用不用换培养基？还望不吝赐教！谢谢！！
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16楼2009-08-13 18:32:22
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Henrylee02

铁杆木虫 (正式写手)
跑电泳确定没问题？
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Happy everyday!
17楼2009-08-13 19:03:19
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学以致用

至尊木虫 (文坛精英)

逍遥派掌门人
加油吧，祝你好运！
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闲看秋水心无事，坐对长空气自豪！
18楼2009-08-13 19:05:37
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Henrylee02

铁杆木虫 (正式写手)
★
feitiannongying(金币+1,VIP+0): 8-13 19:18
凝胶是否过浓！
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Happy everyday!
19楼2009-08-13 19:06:43
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feitiannongying

铁杆木虫 (著名写手)
12%的胶。胶应该没问题。
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20楼2009-08-13 19:19:47
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