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学员CSJmmu

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR后电泳条带很浅,换了引物、重新提取了核酸也还是这样 已有2人参与

原本是想做荧光定量PCR,但是有些基因能扩增出来,有些不能,扩增出来的循环数都很高,所以做了普通的PCR测试引物的情况,结果就是条带非常浅。一开始是怀疑引物有问题,就从网上找了引物合成的详细步骤一步一步的做,结果条带还是很浅。所以想是不是模板有问题,因为线虫体壁裂解总是不彻底,所以这次直接提取了RNA,逆转录之后又跑了PCR,跑胶之前测了A260/280和A260/230,分别是1.807和2.331 。跑胶的结果还是非常浅的条带,但是marker是过曝的。不是有拖尾那种浅,看起来很干净,没有拖尾,就在最后有一条很浅的干净的条带。marker用的是DL2000的,产物的大小本来也该在最下面。现在怀疑是引物二聚体。但是换了这么多对引物,如果一直有引物二聚体,那是哪里的问题呢?求助大家,谢谢~
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)

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4楼2021-12-31 14:09:29
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匿名

用户注销 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2021-05-15 14:22:20
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jmqt7140

禁虫 (正式写手)

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3楼2021-12-20 11:56:51
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zzsa

新虫 (初入文坛)

楼主你好 我想问问你怎么提的线虫RNA,用的什么试剂盒或者试剂

发自小木虫Android客户端
5楼2022-06-29 09:32:27
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