应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后电泳条带很浅，换了引物、重新提取了核酸也还是这样
61/1返回列表
查看: 2456  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者学员CSJmmu将赠送您 30 个金币

学员CSJmmu

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR后电泳条带很浅，换了引物、重新提取了核酸也还是这样 已有2人参与

原本是想做荧光定量PCR，但是有些基因能扩增出来，有些不能，扩增出来的循环数都很高，所以做了普通的PCR测试引物的情况，结果就是条带非常浅。一开始是怀疑引物有问题，就从网上找了引物合成的详细步骤一步一步的做，结果条带还是很浅。所以想是不是模板有问题，因为线虫体壁裂解总是不彻底，所以这次直接提取了RNA，逆转录之后又跑了PCR，跑胶之前测了A260/280和A260/230，分别是1.807和2.331 。跑胶的结果还是非常浅的条带，但是marker是过曝的。不是有拖尾那种浅，看起来很干净，没有拖尾，就在最后有一条很浅的干净的条带。marker用的是DL2000的，产物的大小本来也该在最下面。现在怀疑是引物二聚体。但是换了这么多对引物，如果一直有引物二聚体，那是哪里的问题呢？求助大家，谢谢～
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2021-05-15 11:20:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
赞一下
2楼2021-05-15 14:22:20
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

jmqt7140

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
3楼2021-12-20 11:56:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jmqt7140

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2021-12-31 14:09:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzsa

新虫 (初入文坛)
楼主你好 我想问问你怎么提的线虫RNA，用的什么试剂盒或者试剂

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2022-06-29 09:32:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嚯嚯哈嘿19

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

cDNA浓度高吗？如果浓度足够的话，可以在pcr条件中适当提高cDNA的浓度，比如20ng，甚至500ng。另外小条带可以试试高浓度的琼脂糖胶，比如2%甚至更高一点，可以让引物二聚体适当与目的片段分离。如果提高了还是没有，那就换一家的引物合成试试
赞一下 回复此楼
6楼2022-07-01 10:49:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员CSJmmu 的主题更新
61/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +8 mingmingry 2026-03-09 9/450 2026-03-11 10:23 by 沙漠之狐994
[基金申请] 第二个面上项目的获批几率如何？ +5 wawm9296 2026-03-04 7/350 2026-03-11 09:59 by 最爱编纂辞典
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +8 化工人999 2026-03-09 8/400 2026-03-10 15:21 by houyaoxu
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
[考研] 一志愿清华深研院材料专硕294分，专业课111分，本科中南大学材料，有六级，有工作经验 +4 H14528 2026-03-04 4/200 2026-03-10 11:03 by dj19940201
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 320求调剂 +4 魏zy 2026-03-08 4/200 2026-03-09 16:14 by ruiyingmiao
[考研] 【求调剂】293分环境工程求调剂材料/化工，服从调剂，抗压能力强！ +13 xiiiia 2026-03-04 14/700 2026-03-09 14:06 by macy2011
[考研] 一志愿苏大材料工程专硕293求调剂 +5 钢铁大炮 2026-03-04 5/250 2026-03-09 09:49 by EBSD
[考研] 288求调剂085600材料与化工 +13 Daunrin 2026-03-07 15/750 2026-03-08 19:10 by 加号+
[考研] 化学工程与技术316求调剂 +7 Sixuan wang 2026-03-06 7/350 2026-03-08 11:23 by 我的船我的海
[考研] 化学工程求调剂 +12 化工人999 2026-03-04 12/600 2026-03-08 11:17 by 我的船我的海
[考研] 2026调剂】考试A区0703化学类323分 诚求接收 +3 卷柏卷柏 2026-03-05 4/200 2026-03-07 17:00 by yuandd_2001
[考研] 求调剂 +4 呼呼？~+123456 2026-03-05 5/250 2026-03-06 23:15 by L135790
[考研] 308求调剂 +7 倘若起风了呢 2026-03-05 9/450 2026-03-06 22:59 by 倘若起风了呢
[考研] 求材料调剂 +4 berdmond 2026-03-05 4/200 2026-03-05 19:45 by 黑衣馒头人
[考研] 267调剂求助 +5 聪少OZ 2026-03-04 5/250 2026-03-05 09:38 by kakakapanpan
[考研] 材料专硕346求调剂 +3 旺一下 2026-03-04 3/150 2026-03-04 16:26 by sslc1985
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭